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挥发性脂肪酸的测定
一、GC（Gaschromatograph）工作条件
仪器：GC-14B型气相色谱仪（日本岛津公司）
毛细柱：NUKOLTMCapillaryColumn(Supelco)；Column
No.34292-07B
30m×0.32mm×0.25μmfilmthickness
气相色谱仪参数：色谱柱采用毛细吸管柱，柱温130℃，汽化温度
180℃，采用氢离子火焰检测器，检测温度180℃，载气为氮气，
压力为60KPa，氢气压力为50KPa，氧气压力50KPa，灵敏度（档）
1
为10，衰减3.0
二、样品制备
1．试剂制备
（1）配制25%w/v的偏磷酸溶液，将25克偏磷酸溶在100mL双
蒸水中
（2）巴豆酸的配制，在100ml的偏磷酸溶液中加入0.6464g的巴豆
酸，定容到100mL。
（3）标准样品，准确称取色谱标准级乙酸0.9100g、丙酸0.3700g、
丁酸0.1765g、异丁酸0.1765g、戊酸和异戊酸分别为0.1985g，
分别溶于双蒸水中，再各自定容至100mL。
2．样品制备
(1)发酵液取（或过滤瘤胃液）VFA测定1ml样品到离心管中，再
加入0.2ml的偏磷酸巴豆酸混合溶液，－20℃冰箱保存过夜，解
冻后12000rpm离心10min，取上清液保存，测定前再12000rpm
离心10min(或少许通过0.22μm针式滤器，滤液直接进样用1.0微
升微量进样器瞬时注入色谱仪，进样量为0.2－1.0μL。
(2)食糜及粪样VFA测定取1克置于离心管中，加入5－10倍的
双蒸水，混合均匀。取1mL上清夜，加偏磷酸巴豆酸0.2mL/mL。
其它步骤同上。
3．保留时间的确定
与样品处理相同，在1ml标准样品中加入0.2mL偏磷酸与巴
豆酸的混合样，上样测出乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊
酸的保留时间。
4．有机酸浓度的计算
通过标准样品和内标巴豆酸各自的（或浓度）和峰面积可以计
算出乙酸、丙酸及丁酸等有机酸的相对校正因子，然后根据乙酸、
丙酸及丁酸的重量（或浓度）与其峰面积成正比计算出各个样品中
的乙酸、丙酸及丁酸浓度。
（样品某酸峰面积值×巴豆酸标样峰面积×某酸标样浓度）
某酸浓度(mM)＝
（样品中巴豆酸面积值×标样某酸峰面积）
5．有机酸重现率
将某有机酸（如乙酸）连续上样几次，测定其峰面积值，利用
某酸峰面积值和内标峰面积值计算其重现率。
乙酸重现率变异系数：1.2872±0.06404
丙酸重现率变异系数：0.5104±0.01961
丁酸重现率变异系数：0.3422±0.01037
异丁酸重现率变异系数：0.4668±0.01447
戊酸重现率变异系数：
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