人教版高中生物选择性必修第3册 生物技术与工程 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序.pptVIP

;内容索引;素养目标;课前篇自主预习;一、基因工程的基本操作程序

1.目的基因的筛选与获取。(前提)

2.基因表达载体的构建。(核心)

3.将目的基因导入受体细胞。(关键)

4.目的基因的检测与鉴定。(保证);二、目的基因的筛选与获取

1.目的基因:用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。主要是指编码蛋白质的基因,如与生物抗逆性、生物制药、毒物降解和工业用酶等相关的基因。

2.筛选合适的目的基因

(1)从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。

(2)应用测序技术、序列数据库、序列比对工具等认知更多的基因结构和功能,以便找到合适的目的基因。;3.获取目的基因的途径

(1)人工合成目的基因。

基因库≠基因文库

(2)构建基因文库获取目的基因。

(3)PCR获取目的基因。;聚合酶链式反应

4.利用PCR获取和扩增目的基因

(1)PCR的目的:在体外对目的基因的核酸序列进行大量复制。

(2)PCR原理:DNA半保留复制。

(3)PCR条件:一定的缓冲溶液、DNA模板、分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶。

分别与两条模板链结合,使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸;(4)每次循环的过程:变性→复性→延伸。

①变性:当温度超过90℃时,双链DNA解聚为单链。

打开DNA双链

②复性:冷却至50℃左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

③延伸:加热至72℃左右时,4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。

(5)特点:上一轮循环的产物作为下一轮反应的模板,每一次循环后,目的基因的量可以增加一倍,即成指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环的次数)。;(6)鉴定:常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物。

①DNA分子具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下,这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动,这个过程就是电泳。一般为1~5V/cm

“同性相斥、异性相吸”

②在琼脂糖凝胶电泳时,DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、

DNA分???的大小和构象等有关。

③凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。;自我检测

1.PCR是根据DNA半保留复制的原理,在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件,对目的基因进行大量复制的技术。判断下列有关PCR的表述是否正确。

(1)PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应。(×)

(2)用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。(√)

(3)PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶。(×)

(4)PCR过程中需要模板DNA和一个引物分子。(×);2.(2021山东聊城高二期中)下列有关PCR技术的叙述,错误的是()

A.PCR技术的原理是DNA半保留复制

B.变性过程中破坏的是磷酸二酯键

C.复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的

D.延伸过程中需要耐高温的DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸等,无须添加ATP;答案B

解析PCR技术是利用DNA双链半保留复制,将基因的核苷酸序列不断地加以复制,使其数量呈指数方式增加,A项正确;变性过程是目的基因DNA受热变性后解链为单链,破坏的是氢键,B项错误;引物是一段目的基因已知的核苷酸序列,复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的,C项正确;延伸过程中需要模板DNA、四种dNTP、耐高温的DNA聚合酶等,无须添加ATP,D项正确。;基因工程的核心工作

三、基因表达载体的构建

1.基因表达载体构建的目的

使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。;2.基因表达载体的组成;3.基因表达载体的构建过程

一般用同种或能产生相同末端的限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接,形成一个重组DNA分子(如下图)。;自我检测

1.作为重组载体应具备的结构有目的基因、启动子、终止子、标记基因等。判断下列有关基因表达载体的表述是否正确。

(1)表达载体的复制和目的基因的表达均启动于复制原点。(×)

(2)外源DNA必须位于重组质粒的启动子上游或终止子的下游才能进行表达。(×)

(3)基因表达载体中需要含有起始密码、终止密码、目的基因、标记基因。(×)

(4)借助抗生素抗性基因可将含