人教版高中生物选择性必修第3册 生物技术与工程 第3章 基因工程 微专题3 基因工程相关技术及过程分析.pptVIP

;一、PCR技术

1.PCR技术的原理与条件;2.PCR技术的过程;典例1基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。

(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。?

(2)生物体细胞内的DNA复制开始时,解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时,使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。?

(3)目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是。?;答案(1)基因组文库cDNA文库(2)解旋酶加热至90℃以上氢键(3)Taq酶热稳定性高,而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活

解析(1)基因文库包括基因组文库和cDNA文库。(2)生物体细胞内DNA复制开始时是利用解旋酶进行解旋的,而在体外利用PCR技术扩增目的基因时,则是通过加热至90℃以上进行解聚的,二者都破坏了碱基对中的氢键。(3)在PCR过程中,要加热至90℃以上,所以使用热稳定性高的Taq酶,而不使用在高温下会失活的大肠杆菌DNA聚合酶。;变式训练1(多选)(2021江苏宜兴中学高二期中)聚合酶链式反应(PCR)是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术。下列关于PCR的叙述正确的是()

A.为保证模板链与引物结合的效率,两种引物之间尽量避免存在互补序列

B.引物与模板链结合后,引导子链从引物的5端开始延伸

C.两种引物上设计加入不同限制酶识别序列,主要目的是使目的基因定向插入运载体

D.复性所需的温度、时长和延伸所需的温度、时长均与引物有关;答案AC

解析引物自身不应存在互补序列,否则会出现引物与自身配对、引物跟引物配对情况,降低PCR的效率,A项正确;DNA复制时,引物先与模板链配对结合,然后在引物的3端进行子链延伸,在引物的5端不能进行子链延伸,B项错误;设计引物时需要避免引物之间碱基互补配对而造成引物自身环化的现象,为了便于扩增的DNA片段与载体连接,常在两条引物上设计加入不同的限制酶识别位点,主要目的是使目的基因能定向插入表达载体,避免目的基因自身环化,C项正确;复性所需温度与时长和引物有关,而延伸所需的温度、时长与引物无关,D项错误。;变式训练2(2021山东济宁高二期中)新冠疫情的快速控制,离不开政府的科学决策和我国对新冠病毒(RNA病毒)的快速检测能力。荧光定量PCR技术可定量检测样本中DNA含量,其原理是:在PCR反应体系中加入引物的同时,加入与某条模板链互补的荧光探针(被荧光标记的核苷酸链),当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针,使荧光监测系统接收到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成(如图1)。随着PCR的进行,荧光信号的强度也等比例增加,可通过荧光强度的变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图(如图2)。Ct值(循环阈值)的含义为:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。请回答下列问题。;(1)上海团队是利用体外培养的人肝癌细胞分离出新型冠状病毒毒株的。体外培养人肝癌细胞时,应满足所需要的营养、、温度、pH和渗透压、气体环境等条件。若使用合成培养基还需要添加血清,因为。?

(2)新冠病毒是一种单链RNA病毒,检测时取检测者的mRNA,在逆转录酶的作用下合成cDNA,再在反应体系中加入引物、、4种脱氧核苷酸(dNTP)、缓冲体系、荧光标记的新冠病毒核酸探针。引物的作用是。PCR每个循环包括3个阶段。?;(3)图2中“平台期”出现的最可能的原因是。理论上,在检测过程中,有荧光标记的“杂交双链”出现,则说明检测结果呈(填“阴”或“阳”)性,但为了保证检测结果的准确性,一般要达到或超过阈值时才确诊,Ct值越大表示被检测样本中病毒数目越。?;答案(1)无菌无毒的环境人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚(2)耐高温的DNA聚合酶使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸变性、复性、延伸(3)反应体系中的原料(引物,探针)数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加阳少

解析(1)利用动物细胞培养技术体外培养人肝癌细胞时,应满足细胞生长和增殖所需要的营养、温度、pH、气体环境和无菌无毒等条件。由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚,若使用合成培养基,还需要添加血清、血浆等一些天然成分。;(2)荧光PCR法基本原理是: