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浅述奶牛传染病检测和预防措施

[摘要]奶牛传染性鼻气管炎对奶牛的产奶量及繁殖性能有影

响，奶牛群继发性流产有时高达50％。本研究于2006－2008年对

某省部分奶牛场进行这5种疫病的血清学监测，以了解这些病的流

行情况，尽早控制，减少损失，保障某省奶牛养殖业的快速发展。

[关键词]乙型肝炎；奶牛传染病；检测

一、材料与方法

1.材料

乙型肝炎诊断试剂盒购于上海某生物有限公司；牛传染性胸膜

肺炎补体结合反应抗原、标准阴性血清和阳性血清、溶血素补体由

某生物制品厂提供；牛传染性鼻气管炎抗原、ibr弱毒株、阳性血

清购于中国兽医药品监察所，阴性血清取自检查牛；奶牛血清来源

于某省市的奶牛场和奶牛专业户。

2.方法

(1)酶联免疫吸附试验检测奶牛类人乙型肝炎

①每孔加入待检样品50μl，设阴、阳性对照各2孔，每孔50

μl，并设空白对照1孔。②手工洗板，弃去孔内液体，洗涤液注

满每孔静置5s，甩干、重复5次。③每孔加入酶结合物50μl(空

白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃孵育30min。④重复操作

②。⑤每孔加显色剂a液、b液各50μl，充分混匀，封板，置37℃

孵育15min。⑥每孔加入终止液50μl，混匀。⑦用酶标仪读数，

取波长在450nm，先用空白孔校零，然后读取每孔d值。

(2)类人乙型肝炎病理形态学观察

用肝脏穿刺法观察类人乙型肝炎病理形态学。用长12～15cm，

内径3mm的长注射针头对20头奶牛11～12肋间进行穿刺，取肝脏

组织活体样本，将其保存于10％福尔马林中。同时解剖hbsag、hbeag

双阳性奶牛，做病理切片观察。用he、vangieson-氏、过碘酸一苯

肼schiff(pas)希夫氏染色法分别对肝脏组织切片.进行染色，同时

用透视电镜做超微结构观察。另将一部分肝脏组织活体样本放在灭

菌的平皿中，剪碎研磨，用灭菌生理盐水稀释后，吸取上清液1.5ml，

置eppendorf管中，经差数离心和饱和硫酸铵沉淀，初提物再经150、

300、500g/l蔗糖梯度离心，peg浓缩后，负染，电镜观察病毒颗

粒。

(3)补体结合反应检测牛传染性胸膜肺炎

血清(包括被检血清(样品血清)、阳性血清(补体结合试验标准

血清)、阴性血清(补体结合试验标准血清)、致敏红细胞(对照)、

抗原(对照)孔分别加入抗原(补体结合试验抗原)，阴性血清对照

孔、致敏红细胞对照孔不加抗原；然后分别加入补体，致敏红细胞

对照孔不加补体；再加入灭菌巴比妥缓冲液，振荡混匀后置37℃水

浴30min；再加入6％致敏红细胞(绵羊红细胞与15个单位的溶血

素混合液)，振荡均匀后置37℃30min，2000r/min离心5min，观察

结果。

二、试验结果

1.奶牛乙型肝炎

(1)奶牛肝功能检测

对hbsag、hbeag双阳性的奶牛进行肝功能检测，在10头双阳

性中有8头的谷氨酸丙酮转氨酶(gpt)≥谷氨酸草酰酸转氨酶

(got)，gpt在400～600u/l之间，表现为急性病毒性乙型肝炎(ahb)。

2头奶牛血清gpt缓慢上升，缓慢下降，gpt在200—300u/l之间，

表现为慢性病毒性乙型肝炎(chb)。

(2)奶牛乙型肝炎病毒形态学观察

将hb-sag、hbeag双阳性奶牛肝脏组织做电镜观察，发现肝脏

组织中有密集的hbv颗粒，包括大球形dane颗粒、小球形颗粒、

管球形颗粒3种。这些颗粒与人hbv的颗粒相似(图1)。

(3)奶牛乙型肝炎病理组织学观察

病牛肝脏主要表现为肝细胞的变性：胞浆疏松、气球样变(水肿

变性)、脂肪变性、嗜酸性变、毛玻璃样变，肝细胞坏死，炎症细

胞浸润，肝实质细胞增生和间质组织增生(图2、3)。

(4)奶牛乙型肝炎超微结构观察

肝细胞胞浆内线粒体变性、坏死、溶解、