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GB/TXXXXX—XXXX

植物中游离氨基酸的测定

1范围

本标准规定了植物中游离氨基酸含量的测定方法，包括全自动氨基酸分析仪法（第一法）、高效液

相色谱仪法（第二法）和液相色谱-质谱/质谱法（第三法）三种方法。

本标准适用于茶叶、中药材、烟草等植物样品中游离氨基酸的测定。

注：本标准检测的氨基酸种类参加附录A。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

游离氨基酸freeaminoacids

植物材料中未与其他化学物质结合，以单个分子或离子形式存在，可被水溶液或其他溶剂直接浸提

出来的氨基酸。

4全自动氨基酸分析仪法（第一法）

4.1原理

样品中游离氨基酸经沸水提取后，经氨基酸分析仪的磺酸型阳离子交换柱分离后，在135℃下加热

氨基酸与茚三酮混合反应，伯胺与茚三酮生成蓝紫色化合物，仲胺与茚三酮生成黄色化合物，分别在

570nm和440nm波长下检测两种衍生产物，保留时间定性，外标法定量。

4.2试剂或材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。

4.2.1试剂

4.2.1.1氨基酸标准品：纯度＞98%，参见附录A。

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GB/TXXXXX—XXXX

4.2.1.2柠檬酸锂（四水）：优级纯。

4.2.1.3氯化锂：优级纯。

4.2.1.4柠檬酸：优级纯。

4.2.1.5氢氧化锂：优级纯。

4.2.1.6硼氢化钠：优级纯。

4.2.1.7无水乙酸钠：优级纯。

4.2.1.8茚三酮：优级纯。

4.2.1.9无水乙醇：优级纯。

4.2.1.10硫代双乙醇：优级纯。

4.2.1.11聚氧乙烯月桂醚：优级纯。

4.2.1.12辛酸：优级纯。

4.2.1.13苯甲醇：优级纯。

4.2.1.14乙二醇甲醚：优级纯。

4.2.1.15冰乙酸：优级纯。

4.2.1.16高纯氮：纯度≥99.999%。

4.2.1.17快速定量滤纸。

4.2.1.180.45μm水相滤膜。

4.2.1.190.45μm有机相滤膜。

4.3标准溶液配制

4.3.1混合氨基酸标准储备液配制

称取各氨基酸对照品适量，用纯水溶解，配制成混合溶液。混合标准溶液中的茶氨酸和其它20种

氨基酸的浓度分别为5.00µmol/mL和1.25µmol/mL。储备溶液冷冻保存有效期为1个月。

4.3.2混合氨基酸标准工作液配制

准确吸取2000µL氨基酸混合母液（见4.3.1）至5mL容量瓶中，用纯水稀释定容至刻度，摇匀，

即得到第一份标准溶液。将第一份标准溶液逐级稀释2倍，制成总共7个不同浓度的梯度标准溶液，7

个浓度标准溶液的混合标样中茶氨酸及其它20种氨基酸的浓度分别为：2000.00nmol/mL和500.00

nmol/mL，1000.00nmol/mL和250.00nmol/mL，500.00nmol/mL和125.00nmol/mL，250.00nmol/mL

和62.50nmol/mL，125.00nmol/mL和31.25nmol/mL，62.50nmol/mL和15.63nmol/mL，31.25nmol/mL

和7.81nmol/mL。氨基酸标准工作溶液现配现用。

4.4流动相配制

4.4.1流动相B1（pH2.8）配制

准确称取柠檬酸锂（四水）5.73g，氯化锂1.24g，柠檬酸19.90g，溶于70