第三章 细胞生物学研究方法课件.pptVIP

3第三章1PopulationcellcultureCloningcellculture3第三章1原代培养（primaryculture）：即培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养（Passage）。细胞系（cellline）：具有特定生物学与遗传学特征，且能在体外稳定永久生生长的细胞群体。通常可来自肿瘤组织的细胞群或培养中发生突变或转化的细胞。有限细胞系永生化细胞系细胞株（cellstrain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。3第三章1常用的几种细胞系3第三章1（二）植物细胞培养1.外植体培养：诱发产生愈伤组织。用于研究植物的生长发育、分化和变异；进行无性繁殖；制取代谢产物。2.悬浮细胞培养：适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。3.原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点：–①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA；–②便于进行细胞融合，形成杂交细胞；–③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。4.单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。3第三章13第三章1二、细胞工程（一）细胞融合通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cellfusion）或细胞杂交。同核体：相同基因型的细胞融合而成。异核体：不同基因型的细胞融合而成。3第三章1自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。3第三章1（二）单克隆抗体技术正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein1975将两种细胞杂交而发明了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。3第三章13第三章1（三）显微注射技术尼康NT-88NE显微操作/注射仪显微操作技术（micromanipulationtechnique）是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micromanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。3第三章1显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。细胞核移植技术已有几十年的历史，Gordon等人（1962）对非洲爪蟾进行核移植获得成功。我国著名学者童第周等在鱼类细胞核移植方面进行了许多工作，并取得了丰硕成果。3第三章1第四节模式生物3第三章1由于基因在进化上的保守性和遗传密码的通用性，从一种实验生物得到的有关基因性质或功能方面的信息通常也适用于其他生物。模式生物通常具有个体小、容易培养、操作简单、生长繁殖快等特点。3第三章13第三章13第三章13第三章13第三章1思考题名词解释：激光共聚焦显微镜荧光漂白恢复技术荧光能量共振转移技术冷冻蚀刻技术电镜负染技术透射电子显微镜显微分光光度术原代培养克隆培养细胞系细胞株原生质体模式生物简述生物学研究的一般策略路线。决定显微镜分辨率的参数有哪些？提高显微镜分辨率的途径有哪些？免疫荧光显微术的原理与应用。流式细胞技术的原理及应用。透射电镜及扫描电镜技术的原理及成像特点。3第三章1*采用生物学、化学和物理学结合的方法，发明了一种荧光促进剂，激发诸如叶绿素等植物内部潜在的发光物质，让花朵自然产生荧光。*科研人员通过一种荧光促进剂来激发诸如叶绿素等玫瑰内部潜在的发光物质，让玫瑰花自然产生荧光。**载物台面积较大，在物镜上方，载物台上方有一个长焦距聚光器和照明光源，因此聚光器与载物台之间的工作距离提高可以放置培养皿、培养瓶等容器，直接对培养的细胞进行观察。3第三章1Scanningelectronmicroscopy.Scanningelectronmicrographofthe