《牛奶碱性蛋白的测定 高效液相色谱法》.pdf

中国营养保健食品协会团体标准

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牛奶碱性蛋白的测定高效液相色谱法

Determinationofmilkbasicprotein-Highperformanceliquidchromatographymethod

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国营养保健食品协会发布

牛奶碱性蛋白的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了牛奶碱性蛋白含量的测定。

本文件适用于牛奶碱性蛋白原料中牛奶碱性蛋白含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本

适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文

件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1牛奶碱性蛋白

以鲜牛乳为原料，经脱脂、过滤、浓缩、去除酪蛋白等酸性蛋白、阳离子层析、冷冻

干燥等工艺制成的蛋白。

4原理

试样溶解后，经弱阳离子交换色谱柱分离，蛋白在其等电点时呈电中性，与色谱柱离

子交换基团无相互作用，样品中的碱性蛋白在对应等电点下被洗脱，紫外检测器检测，面

积归一化法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1胰蛋白酶原：CAS：9002-08-8。

5.22-CHNOS·HO

吗啉乙磺酸一水合物（61342）：分析纯。

5.3氯化钠（NaCl）：分析纯。

5.4CHNO

三羟甲基氨基甲烷（4113）：分析纯。

5.5乙二胺四乙酸二钠盐二水合物（CHNNaO·2HO）：分析纯。

10142282

5.6NaOH

氢氧化钠（）：分析纯。

5.7CHN

二乙烯二胺（4102）：分析纯。

5.81,3--2,4-CHN

二氮杂环戊二烯（342）：分析纯。

5.9HCl36%~38%

盐酸（）：。

5.10CHFO

三氟乙酸（232）：分析纯。

5.11氢氧化钠溶液（4g/L）：称取4.0g氢氧化钠（5.6），加入900mL水，溶解后，用水

定容至1L，混匀。

5.12盐酸溶液（10%）：吸取10mL盐酸（5.9），加入至80mL水中，定容至100mL，混

匀。

5.13三氟乙酸溶液（0.1%）：吸取1mL三氟乙酸（5.10），用水稀释至1L。

5.14流动相A（pH=5.0）：分别称取0.35g二乙烯二胺（5.7），0.27g1,3-二氮杂-2,4-环

戊二烯（5.8）和0.49g三羟甲基氨基甲烷（5.4），加入900mL水溶解，用盐酸溶液（5.12）

调节pH值至5.0±0.1，用水定容至1L，混匀。

5.15流动相B（pH=11.4）：分别称取3.5g二乙烯二胺（5.7），2.7g1,3-二氮杂-2,4-环戊

二烯（5.8），4.9g三羟甲基氨基甲烷（5.4），加入900mL水，用盐酸溶液（5.12）或氢

氧化钠溶液（5.11）将pH调节到11.4±0.1，用水定容至1L，混匀。

5.16流动相C：称取233.76g氯化钠（5.3），加入900mL水，溶解后用水定容至1L，混

匀。

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