T_HBIQA 0003.4-2024 食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第4部分：秋刀鱼实时荧光PCR法.docxVIP

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T/HBIQA

河北省检验检疫学会团体标准

T/HBIQA0003.4—2024

食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法第4部分：秋刀鱼实时荧光PCR法

DetectionofcommonHistamine-richfishderivedingredientinfoodPart4:CololabissairaReal-timePCRmethod

2024-08-15发布2024-10-15实施

河北省检验检疫学会发布

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

T/HBIQA0003-2024《食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法实时荧光PCR法系列标准》分为7个部分：

第1部分：蓝圆鰺实时荧光PCR法第2部分：日本鲭实时荧光PCR法第3部分：沙丁鱼实时荧光PCR法第4部分：秋刀鱼实时荧光PCR法第5部分：竹筴鱼实时荧光PCR法第6部分：鲣鱼实时荧光PCR法

第7部分：蓝点马鲛实时荧光PCR法

本文件为T/HBIQA0003.4-2024，第4部分。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由河北省检验检疫学会提出并归口。

本文件起草单位：石家庄海关技术中心、中国海关科学技术研究中心、石家庄市食品药品检验中心、河北三狮生物科技有限公司。

本文件主要起草人：王建昌、王金凤、艾连峰、姜彦芬、陈志敏、董振国、刘立兵、蒲静、孙晓霞。

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食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法第4部分：秋刀鱼实时荧光PCR法

1范围

本部分规定了食品中秋刀鱼源性成分的实时荧光PCR检测方法。

本部分适用于食品中秋刀鱼源性成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD）为0.1%（质量分数）。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1秋刀鱼Cololabissaira

又称竹刀鱼，属于颌针鱼目（Beloniformes），竹刀鱼科（Scomberesocidae），秋刀鱼属（Cololabis）。

3.2实时荧光PCRreal-timePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。

3.3Ct值cyclethresholdvalue

每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

4.1PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

4.2DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid）

4.3Cytb：线粒体细胞色素b基因（Cytochromebgene）

4.4dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate）

4.5CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide）

4.6Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（tris（hydroxymethyl）aminomethane）

4.7EDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid）

4.8FAM：羧基荧光素（carboxyfluorescein）

4.9BHQ1：黑洞淬灭基团1

5原理

实时荧光PCR法是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现实时监测整个反应进程。提取样品DNA为模板，以秋刀鱼Cytb基因中相对保守且高度特异的引物和探针进行目标物的实时荧光PCR扩增，根据实时荧光PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的强弱判定，实现对秋刀鱼成分的定性分析。

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6试剂和材料

6.1实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。

6.2检测用引物和探针序列见表1。

表1引物和探针序