细胞增殖及其调控 (2).ppt

第63页,共86页，星期六，2024年，5月星体微管动粒微管极微管纺锤极动粒复制好的染色体第64页,共86页，星期六，2024年，5月（三）有丝分裂过程染色体运动的动力机制1、染色体列队与染色体列队相关的蛋白：Mad蛋白和Bub蛋白，可使动粒敏化，促使微管与动粒接触。Mad2和Bud1位于前中期染色体的动粒上，如果染色体被纺锤体微管捕获，Mad2和Bud1蛋白很快从动粒上消失。反之，则不消失，后期不能启动。第65页,共86页，星期六，2024年，5月Mad蛋白和Bub蛋白使动粒敏感化，使动粒与微管接触染色体列队第66页,共86页，星期六，2024年，5月染色体列队假说牵拉假说：认为染色体向赤道方向运动，是由于动粒微管牵拉的结果，动粒微管越长，拉力越大，当染色体两侧动粒微管的作用力达到平衡时，染色体被稳定在赤道板上。外推假说：认为染色体向赤道方向运动，是由于星体的排斥力将染色体外推的结果，染色体距离中心体越近，星体的外推力越强。第67页,共86页，星期六，2024年，5月第68页,共86页，星期六，2024年，5月染色体分离后期A和后期B阶段假说后期A：动粒微管的缩短，将染色体逐渐拉向两极。动粒微管的缩短是微管蛋白亚单位去聚合结果。是动力蛋白沿动粒微管向极部运动的结果。后期B：极微管在正端添加微管蛋白亚单位进行聚合延长，使两极的极微管产生重叠的区.KRPs在来自两极的极性微管间搭桥。KRPs向微管正极行走，使极微管间产生滑动，形成将两极分开的力.胞质动力蛋白在星体微管和细胞膜之间搭桥，向星体微管负极运动，进一步将两极拉长.第69页,共86页，星期六，2024年，5月后期A后期B◆力产生的机制：◆后期A，微管去聚合假说◆后期B，纺锤体微管滑动假说◆染色体分离的力●拉力：由动粒微管去装配产生●推力：由极微管的聚合所产生第70页,共86页，星期六，2024年，5月第三节细胞周期的调控美国科学家利兰·哈特韦尔、英国科学家迪莫西·亨特和保罗·纳斯因发现了细胞周期的关键分子的调节作用获得2001年医学生理诺贝尔奖。利兰·哈特韦尔发现控制细胞周期的“start”基因。迪莫西·亨特发现细胞周期的关键调节物质CDK（细胞周期蛋白依赖激酶）保罗·纳斯发现了调节CDK功能的cyclin（细胞周期蛋白）第71页,共86页，星期六，2024年，5月一、MPF（成熟促进因子）的发现◆细胞融合与PCC(Prematurechromosomalcondense)1970年，Rao和Johnson将细胞进行同步化培养出不同时期的细胞，将M期细胞与其他间期细胞在仙台病毒介导下融合，并继续培养一段时间，发现与M期细胞融合的间期细胞发生了形态各异的染色体凝集，称为染色体超前凝集（PCC）；不同时期的间期细胞与M期细胞融合，产生的PCC形态各异。G1+MPCC细单线状S+MPCC为粉末状G2+MPCC双线状第72页,共86页，星期六，2024年，5月人M期细胞与袋鼠（Ptk）G1、S、G2期细胞融合诱导PCC：提示M期细胞存在诱导PCC的因子；称为细胞促分裂因子(MPF)第73页,共86页，星期六，2024年，5月MPF的发现及其生化实质◆MPF的发现注射实验★用非洲爪蟾分裂中期的卵细胞质提取物注射到非洲爪蟾的卵母细胞，能使卵母细胞进入分裂中期，使核破裂，并形成纺锤体★用细胞间期的提取物注射卵母细胞，不能使卵母细胞进入分裂中期第74页,共86页，星期六，2024年，5月注射实验表明：成熟卵细胞质中，含有促卵母细胞成熟的因子，称做MPF。MPF在细胞周期中波动很大，在有丝分裂前急剧升高，有丝分裂后急剧下降，且普遍存在于动物细胞注射来自M期细胞的细胞质容易检测到的纺锤体注射来自间期细胞的细胞质卵母细胞进入M期卵母细胞不进入M期卵母细胞卵母细胞第75页,共86页，星期六，2024年，5月MPF的纯化工作：进展缓慢，1988年，Maller实验室的Lohka等人分离得到微克级的纯化MPF，证明其含有P32和P45两种蛋白，只有两者结合后，才表现出蛋白激酶活性。第76页,共86页，星期六，2024年，5月P34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系以酵母为材料进行研究cdc基因:与细胞分裂和细胞周期调控有关的基因。对分离的裂殖酵母突变体的研究发现，Cdc2基因是一种重要的基因，缺乏Cdc2基因，细胞停留在G2/M交界处。其表达产物是P34cdc2蛋白，具有蛋白激酶活性。但其激酶活性的表现