9、初始污染菌检测方法及修正系数验证报告.docx

XXXXX初始污染菌检测方法及修正系数验证报告

验证项目

XXXXX初始污染菌检测方法及修正系数验证报告

方案编码

VR-14-2018

验证报告审核单

1概述

起草

部门

职务

签字

日期

质量部

无菌检验员

审核

部门

职务

签字

日期

质量部

主管

批准

部门

职务

签字

日期

生产技术部

管理者代表

目录

2确认依据

3验证组员和相关职责

4确认过程

5验证结果及评价

6偏差与处理

7再确认

1概述

初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品内毒素有直接关系，故而对其检测方法进行验证，确认修正系数，确保初始污染菌的检测有效性及准确性。

2确认依据

GB/T19973.1—2015医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计

《中国药典》2015版

4确认过程

3验证组员和相关职责3.1验证组员

审核和批准验证方案

组织协调验证方案的实施

记录相关方案的修订和偏差

记录和检查方案实施过程中产生的数据

根据变更控制，偏差的要求，组织相关的调查、纠正及预防协助质量控制QC,质量保证QA执行所有和设备相关的验证审核和批准方案的修订和偏差

审核和批准相关验证试验结果和验证总结报告

3.2质量部QC

编制验证方案

确保所有仪器仪表及测试设备在验证之前校准

根据变更控制偏差的要求，制定相关的偏差报告，参与调查，纠正及预防按照方案实施验证，负责取样检测

3.3质量部主管

审核验证方案

为方案实施提供支持

提供支持验证的相关SOP

根据变更控制，偏差的要求，组织制定有关报告，进行相关的调查、纠正及预防审核相关方案的修订和偏差

审核验证试验结果和验证总结报告

3.4管理者代表

最终审核和批准的所有验证方案

最终审核和批准所有验证总结报告

最终审核和批准验证过程中发生的所有偏差、变更等

4.1准备工作

4.1.1人员确认

姓名

部门

岗位

相关培训是否合格?

【是】【否】

【是】【否】

【是】【否】

【是】【否】

确认人/日期：

复核人/日期：

4.1.2仪器

设备名称

设备编号

数量

计量是否在效期内

生化培养箱

1

口是口否

霉菌培养箱

1

□是口否

微生物限度仪

1

口是口否

振荡器

1

口是口否

灭菌锅

1

□是口否

电子天平

1

□是口否

确认人/日期：复核人/日期：

4.1.3其他玻璃器皿及耗材：试管、培养皿、螺纹试剂瓶、无菌滤膜、无菌镊子、无菌吸头(0.2ul)等

4.1.4洗脱液的制备：

无菌0.9%氯化钠溶液：称取9g氯化钠用纯化水溶解至1000ml,进行121℃15min灭菌备用；

无菌0.05%(ml/ml)吐温800.9%氯化钠溶液：取0.05ml吐温80用纯化水加至100ml搅拌溶解；取5ml加至1000ml0.9%氯化钠溶液，进行121℃15min灭菌备用；

4.1.5培养基

细菌用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基(以下简称TSA)

真菌用培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基(以下简称SDA)以上培养基按说明书要求进行配制、灭菌备用。

4.2菌液制备

接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18一24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20一25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每1ml菌数小于100cfu(菌落形成)的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20～25℃培养5一7天，加人3～5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。

菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2一8℃在24h内使用。黑曲霉孢子悬液存在2一8℃,在验证过的贮存期内用。

4.3计数培养基适用性检查

4.3.1需氧菌的计数

分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌，接种至胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃,培养不超过3天；每一试验菌株平行制备2个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

4.3.2霉菌和酵母菌的计数

分