鸡枞菌hmg基因的克隆及其在不同发育阶段的表达分析.docx

PAGE4

鸡枞菌hmg基因的克隆及其在不同发育阶段的表达分析

摘要：hmg基因广泛存在于各种生物体内，其表达的蛋白大多属于基因表达调控因子，可参与一些大型真菌的重要生长发育过程。根据本实验室已测序得到的鸡枞菌(Termitomycesalbuminosus)转录组数据库，采用RT-PCR的方法，从鸡枞菌中克隆得到了hmg基因的编码区序列（CDS）。本试验以四个不同生长阶段的鸡枞菌为材料，提取RNA，经过反转录获得cDNA并设计引物，利用qRT-PCR技术分析hmg基因在不同样本中表达量的情况，以期为进一步获取鸡枞菌人工转化子菌株提供理论依据。荧光定量PCR结果表明，hmg基因在鸡枞菌各个时期的表达量具有一定的规律性，呈现先上升后下降的趋势，巢内萌发（TB）时期表达量最多，子实体（TA）时期表达量较少，该基因可能在鸡枞菌子实体萌发中具有较重要的作用，该研究可为将来通过基因改造实现鸡枞菌的人工驯化提供一定的理论基础。

关键词：鸡枞菌；hmg基因；克隆；荧光定量PCR；子实体；人工驯化前言

鸡枞菌（Termitomycesalbuminosus）属于担子菌亚门（Basidiomycotina）、层菌纲（Hymenomycetes）、伞

菌目（Agaricales）、白蘑科（Tricholomataceae）、蚁巢伞属（TermitomycesR.Heim），亦称伞把菇、蚁枞

[1]，含有丰富的生物活性成分，以蛋白质最为丰富，还含有多糖、脂类、皂苷和麦角甾醇等，具有降血糖、降血脂、抗氧化、护肝以及镇痛、抗炎等药理作用[2-5]。鸡枞菌是一种著名的与白蚁共生的野生蘑菇，主要分布在非洲和亚洲[6,7]。这是一个有趣而罕见的真菌和白蚁及其蚁巢共生的典型例子。鸡枞菌长在白蚁巢穴内的一种特殊结构上，这种结构被称为“真菌梳”。真菌梳是由白蚁的粪便和植物凋落物建造的[8,9]。高等植物主要由木质纤维素组成，其中纤维素被木质素包裹起来，因此木质素必须首先被破坏才能够利用纤维素[10,11]。关于白蚁营养系统生真菌的作用，目前，普遍被接受的是“木质素降解假说”，即共生真菌具有降解木质素的能力，这使得纤维素更容易被白蚁自身的纤维素酶攻击[12-14]。白蚁与鸡枞菌之间的良好协同作用使木质纤维素得到有效利用[15]。作为珍贵的野生药食用真菌，鸡枞菌种质资源的开发利用及驯化栽培一直是广大科研人员和爱好野生鸡枞的民间人员乐此不彼的研究项目。然而，鸡枞菌与白蚁共生关系的详细机理尚不清楚。鸡枞菌人工栽培很难实现，目前这种珍贵的真菌仍未实现工业化生产。因此，鸡枞菌的自然资源显得十分稀有和珍贵。

HMG-box转录因子是一类可以结合特定DNA序列的蛋白，它们主要参与调控有性生殖、生长发育等过程。2007年，Aronstein等[16]通过研究发现HMG-box转录因子在蜜蜂病原菌蜂囊菌的复制过程中起重要作用。2009年，

Visacka等[17]通过研究发现HMG-box转录因子与白色念珠菌线粒体类核的形成密切相关。近年来还有研究报道，

HMG-box转录因子对真菌子实体形成具有重要功能。如2011年，Ohm等[18]研究发现，裂褶菌(Schizophyllum

commune)具有HMG-box结构域的转录因子基因hom1和hom2，与菌丝生长及子实体形成具有重要关系，敲除hom1后可以形成数量较多但个体较小的子实体，敲除hom2后则子实体不能发育；此外，裂褶菌野生型菌落形态为非对称型，而敲除hom2后菌落形态变为对称型，表明hom2对裂褶菌菌落形态也有明显的调控作用。2013年，AitBenkhali等[19]通过研究发现HMG-box转录因子在柄孢壳菌(Podosporaanserina)的子实体形成过程中起重要作用。2014年，施乐乐等[20]对金针菇(Flammulinavelutipes)fvhom1基因进行过表达后，发现菌丝生长速度明显减缓，fvhom1转录因子可能具有抑制菌丝生长，促进菌丝扭结形成原基的功能。2015年，卢园萍等[21]研究发现草菇（Volvariella

volvacea）HMG-box转录因子基因vv-exp在原基时期出现高水平表达表明其可能与草菇原基的形成有关。2018年，胡

悦等[22]通过RNAi方法将香菇(Lentinulaedodes)HMG-box转录因子基因lelcrp1进行了沉默，发现RNAi转化子菌丝生长速度均显著慢于出发菌株W1，并且该结果导致部分纤维素及木质素酶基因表达水平相应下调，推测lelcrp1基因沉默子菌丝生长速率降低是由于木质纤维素降解相关酶基因表达受到抑制造成的。由此可见，这类含有HMG-box结构域的转录因子具有调控真菌菌丝生长和子实体形成的重要