毒理学 外源化学物致突变作用.ppt

*常用的致突变试验2、哺乳动物细胞基因突变试验tk和hprt基因编码产物可催化相应核苷的磷酸化反应，生成相应单核苷酸。核苷类似物可作为其底物被磷酸化，磷酸化产物掺入DNA中引起细胞死亡tk和hprt基因发生突变，细胞对核苷类似物产生抗性，在含核苷类似物的选择培养基中细胞集落形成增加，即可判断受试物的致突变性*常用的致突变试验ICH将L5178Y/tk基因突变试验作为哺乳动物细胞基因突变首选试验我国将tk基因突变试验列为评价食品和保健食品安全性的遗传毒性试验方法之一*常用的致突变试验3、微核试验（micromucleustest，MNT）*微核形成：染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整条染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内微核来源？遗传学终点？检测微核的细胞？*常用的致突变试验3、微核试验（micromucleustest，MNT）*蚕豆根尖微核大蒜根尖微核红细胞微核淋巴细胞微核*常用的致突变试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验原理：成红细胞发展为红细胞时，主核排出，成为嗜多染红细胞（PCE），细胞保持嗜碱性约24小时，成为正染红细胞（NCE）并进入外周血。在主核被排出时，微核可留在胞浆中，计数骨髓中有微核的PCE数可判断受试物的染色体损伤作用*常用的致突变试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验*常用的致突变试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验染毒方法缺点*常用的致突变试验其他微核试验方法体外微核试验外周血微核试验细胞质分裂阻断法微核试验免疫荧光染色法和荧光原位杂交法流式细胞仪和图像分析系统自动化微核检测技术*外源化学物致突变作用机制碱基损伤—平面大分子嵌入DNA链具有平面环状结构的化学物以非共价结合方式嵌入核苷酸链之间或碱基之间嵌入到模板链两碱基间，使互补链插入一个多余碱基嵌入到新合成的互补链上，使之缺失一个碱基移码突变*外源化学物致突变作用机制碱基损伤—平面大分子嵌入DNA链嵌入剂（intercalatingagent）能嵌入DNA链上的化学物9-氨基吖啶吖啶橙*外源化学物致突变作用机制碱基损伤—碱基类似物取代*外源化学物致突变作用机制DNA合成期，5-BrU与T竞争取代掺入DNA链中，下次DNA复制时，5-BrU与A配对。但由于溴原子带的负电荷比甲基强，5-BrU发生异构互变，由酮式变为烯醇式，DNA复制时，5-BrU不与A配对，而与G配对，导致TA到CG转换*外源化学物致突变作用机制碱基损伤—碱基化学结构改变或破坏有些化学物可对碱基产生氧化作用，破坏或改变碱基结构，引起碱基置换或链断裂，其作用与DNA复制无关*外源化学物致突变作用机制碱基损伤—碱基化学结构改变或破坏有些化学物在体内形成有机过氧化物或自由基，破坏嘌呤结构，导致链断裂*外源化学物致突变作用机制以DNA为靶的直接诱变（二）DNA链受损嘧啶二聚体形成DNA加合物形成DNA-蛋白质交联物形成*外源化学物致突变作用机制DNA链受损—嘧啶二聚体形成机体或细胞受到紫外线刺激时，DNA发生化学变化，产生嘧啶二聚体和4-6光产物，这些改变阻止DNA复制，导致细胞死亡TT、CC、CT*外源化学物致突变作用机制DNA链受损—嘧啶二聚体形成DNA链间氢键减弱DNA结构局部变形影响DNA复制和转录突变*外源化学物致突变作用机制DNA链受损—DNA加合物形成一些化学诱变剂或其活化产物可与DNA等生物大分子中的亲核基团共价结合形成加合物，使DNA立体构象改变，阻断受损部位复制和转录DNA加合物形成是诱变作用的重要事件*外源化学物致突变作用机制B(a)P-DNAadduct7,8-环氧-B(a)P7,8-二氢二醇-B(a)P7,8-二氢二醇-9,10-B(a)PDNA链局部扭曲和二级结构紊乱*外源化学物致突变作用机制DNA链受损—DNA加合物形成一般化学或生物学方法难使其解离活化癌基因、影响抑癌基因表达*外源化学物致突变作用机制DNA链受损—DNA-蛋白质交联物形成DNA-蛋白质交联物（DNA-proteincrosslink,DPC）是一种稳定的共价结合物，是致突变物对生物大分子的一种重要遗传损害，DPC形成对DNA构象与功能产生严重影响（如突变），因为与DNA交联的是核蛋白*外源