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hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和
表达
【摘要】目的:构建人类促甲状腺激素受体（hTSHR）胞膜外区
氨基端的两个片段hTSHRf（aa29～100）、hTSHRe（aa101～278）的
真核表达载体pcDNA3.1hTSHRf和pcDNA3.1hTSHRe,并在
CHO细胞中进行表达。方法:RTPCR法从人甲状腺正常组织的
cDNA中扩增hTSHRf和hTSHRe,定向插入真核表达载体
pcDNA3.1(D)/V5HisTOPO中,经酶切、PCR和测序鉴定后通过
脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达,RTPCR扩增转染细胞的
cDNA、Westernblot分别鉴定hTSHR在CHO细胞中mRNA和蛋白
水平的表达。结果:RTPCR分别扩增两个片段的阳性克隆株,所得
片段大小与预期一致,经Westernblot鉴定,相对分子质量（Mr）分别
为11900、23600左右,与预期的大小相符。结论:真核表达载体
pcDNA3.1hTSHRf和pcDNA3.1hTSHRe构建成功,RTPCR和
Westernblot检测证实重组质粒能在CHO细胞中高效表达,为进一步
研究pcDNA3.1hTSHRf和pcDNA3.1hTSHRe在体内的基因表达,
建立Graves病的动物模型奠定了基础。
【关键词】TSH受体真核表达Graves’病
人TSHR是一种跨膜性蛋白,属于G蛋白偶联受体,具有7
次跨膜结构,体内主要分布在甲状腺滤泡细胞膜上。hTSHR蛋白由764
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个氨基酸组成,相对分子质量（Mr）为84500,分为膜内区、跨膜区
以及膜外区3个部分［1,2］,编码hTSHR膜外区的基因长度是1300bp,
研究表明TSHR是许多自身免疫性甲状腺疾病（autoimmunethyroid
disease,AITD）中主要的自身抗原之一,TSHR膜外区（TSHR
extracellulardomain,TSHR
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ECD）是其免疫原性区段,抗TSHR的抗体大多结合于此段。
本研究中克隆hTSHRECD氨基端的2个片段编码序列（188～403bp,
407～904bp）,构建其真核表达载体,并转染CHO细胞,进行稳定表
达。
1材料和方法
1.1材料CHO细胞由中国医学科学院血液病研究所药理室
熊东升研究员惠赠,酵母提取物、胰蛋白胨购自OXOID公司,Ham’s
F12、G418、OptiMEM无血清培养基购自Gibco公司;FBS和
bTSH购自Sigma公司。真核表达载体pcDNA3.1(D)/V5HisTOPO
和感受态E.coliTOP10购自Invitrogen公司。DNA快速纯化回收试剂
盒、限制性内切酶HindⅢ以及PyrobestDNA聚合酶购自TaKaRa公
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