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连续应用特立帕肽对正常和去势小鼠骨代谢的影响

李明翰;何友华;童国军;杨德鸿

【期刊名称】《《南方医科大学学报》》

【年(卷),期】2019(039)009

【总页数】7页(P1045-1051)

【关键词】甲状旁腺素;连续刺激;骨质疏松

【作者】李明翰;何友华;童国军;杨德鸿

【作者单位】南方医科大学南方医院脊柱骨科广东广州510515

【正文语种】中文

特立帕肽（TPTD）主要作用于骨骼、肾小管和肠道等系统，调节血清钙盐的稳态

［1-3］。基础和临床研究证明间断小剂量的TPTD显著成骨［4］，用于治疗严

重骨质疏松。但大剂量持续应用时，犹如甲状旁腺素亢进状态，显著促进皮质骨和

松质骨吸收［5］。研究如何降低TPTD破骨作用，保留或者促进成骨活性是有关

PTH研究的一个重要方向［6-7］，而TPTD的皮下持续泵入模型常常被用来研究

其破骨作用。我们在研究hPTH（1-34）及其模拟肽的破骨作用时，意外观察到

hPTH（1-34）增加去势小鼠松质骨量，与之前广泛报道的TPTD促进骨吸收的结

果不符合。TPTD在去势小鼠的成骨作用或促进骨缺损愈合的研究常选用间断给药

的方式，而不采用持续灌注的给药方式［8］。以往TPTD持续灌注促骨吸收的结

果来自于正常小鼠的研究，但在去势后TPTD连续灌注是否还保持相同的促骨吸

收作用并不明确。本文探讨TPTD的破骨作用在正常或去势小鼠并不完全相同，

TPTD持续灌注的给药方式在去势小鼠身上可能没有显现促骨吸收的作用并分析可

能的机制。

1材料和方法

1.1TPTD微量缓释泵的制备

TPTD（重组人PTH（1-34））由广州特立生物科技有限公司合成，0.1%三氟乙

酸（TFA）溶解成10-3mol/L备用。用生理盐水将TPTD储存液按40μg

（kg·d），共14d量配制成0.2mL，注入植入式胶囊渗透泵（ALZET）。空白

对照渗透泵注入等量生理盐水。

1.2微量泵持续泵入小鼠分组及模型的制备

24只6周龄小鼠，适应性喂养1周后，随机分成2组，每组有12只小鼠，进行

卵巢切除（OVX）或假手术处理（SHAM）。卵巢切除按常规方法进行［9］，假

手术进行切除卵巢以外的同样手术过程。1周后对OVX和SHAM小鼠再次随机

分组，形成4个实验分组：（1）假手术对照（SHAM-VEH）组：SHAM后植入

空白对照缓释泵；（2）假手术特立帕肽（SHAM+TPTD）组：SHAM后植入含

TPTD溶液的胶囊缓释泵；（3）卵巢切除对照（OVXVEH）组：OVX后植入空白

对照缓释泵；（4）卵巢切除特立帕肽（OVX+TPTD）组：OVX后植入含TPTD

溶液的胶囊缓释泵。所有小鼠在植入胶囊缓释泵2周后处死。

饲养条件：实验动物分笼，每笼3只，饲养于室温18～29℃，相对湿度40%～

70%的清洁环境中。换气次数8～10次/h，氨浓度≤l4mg/m3，噪声≤60db，

昼夜明暗交替12/12h。隔日更换垫料，自由摄食、摄水。

1.3小鼠骨松质和骨皮质显微结构分析

所有小鼠在植入胶囊缓释泵2周后，行牵引颈椎脱臼法处死，解剖获得双侧下肢，

常温予以4%多聚甲醛固定24～48h。分析前，生理盐水洗涤30min，使其充分

水化。显微CT扫描分析胫骨上段骨和股骨中段的骨量、骨小梁数目、骨小梁离散

度，骨小梁连接系数和骨皮质面积等参数。显微CT（μCT80.ScancoMedicalAG）

参数设置：电压55kV，电流1451mA，层厚12μm。

1.4胫骨骨松质组织学分析

将多聚甲醛固定后的胫骨标本流水冲洗24h，EDTA脱钙液脱钙30d，经过50%、

70%、80%、90%、95%及无水乙醇各处理60min脱水，然后二甲苯透明、浸

石蜡。常规包埋，保持胫骨切面与包埋盒底部平行。石蜡切片厚度5μm。

HE染色按常规进行。TRAP染色：采用SIGMAALDRI