高三生物一轮复习课件基因工程的基本工具和基本操作程序.pptx

基因工程的基本工具和基本操作程序;P400/归纳总结.如何筛选出含有目的基因的受体细胞;归纳总结

选择限制酶的基本原则：

（1）切割目的基因时：能切下目的基因且不破环目的基因；

（2）切割质粒时：不能破坏质粒的启动子、终止子、标记基因（至少保留一个）、复制原点等；

（3）保证目的基因和质粒能连接：用同种限制酶或能产生相同黏性末端的限制酶；

保证目的基因和质粒能正向连接：双酶切

选用含有AmpR和LacZ基因的质粒进行实验有哪些优势？双重筛选。标记基因AmpR可以检测质粒

是否导入，LacZ基因效应可以判断导入的是空质粒还是重组质粒;P400/3.B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。;方法1：PCR扩增技术;方法②：核酸分子杂交技术;方法②：核酸分子杂交技术;过程：提取转基因植物的蛋白质+相应抗体→是否出现杂交带;考点一基因工程的基本工具;2.基因工程的基本工具

（1）限制性内切核酸酶（简称限制酶）;（2）DNA连接酶;（3）基因进入受体细胞的载体;【教材拾遗】（选择性必修3P72旁栏思考）DNA连接酶和

DNA聚合酶不是一回事。原因是①DNA连接酶连接的是两个

DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有

的DNA片段上。②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为

模板，而DNA连接酶不需要模板。

【思考】限制酶来源于原核生物，为什么不能切割自己的

DNA分子？;;3.（选择性必修3P71～72正文）基因工程中用到的工具酶有限制

酶、DNA连接酶、载体。 （×）;;（1）请说出EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶识别的碱基序列及切割的

位点。;（3）以上实例说明限制酶有何特性？该特性的含义是什么？;【探究2】基因工程中的载体;【归纳总结】

1.基因工程的理论基础;2.与DNA有关的几种酶的比较;;2.（2024·江西南昌高三开学考）限制酶是基因工程中必需的工具之

一，下图表示五种限制酶的识别序列及切割位点。下列关于限制酶

的叙述，错误的是（）;限制酶;A.EcoRⅠ和EcoRⅤ切割DNA片段产生的末端分别为黏性末端和

平末端

B.EcoRⅠ和MfeⅠ切割产生的DNA片段能被E.coliDNA连接酶相连在

一起

C.BamHⅠ和Sau3AⅠ切割产生的DNA片段，连接后一定能被BamHⅠ

切割

D.以上五种限制酶均能识别双链DNA的特定序列，并切开特定部

位的磷酸二酯键;考点二基因工程的基本操作程序;（2）利用PCR获取和扩增目的基因;;①在PCR过程中实际加入的为dNTP（即dATP、dGTP、

dTTP、dCTP），既可作为合成DNA子链的原料，又可为

DNA的合成提供能量。

②引物是一小段单链的DNA或RNA，作为新子链的合成起

点，只能结合在母链的3端，使DNA聚合酶能够从引物的3端

开始连接脱氧核苷酸。;（3）人工合成目的基因;②化学合成法：已知某一蛋白质的氨基酸序列，推测出其基

因序列，然后直接合成目的基因，其过程如图：;2.基因表达载体的构建;（2）基因表达载体的组成;（3）基因表达载体的构建过程;【教材拾遗】（选择性必修3P80正文）不能将目的基因插

入载体的标记基因中的原因是标记基因用于鉴定目的基因是

否成功导入受体细胞，以便将含目的基因的细胞筛选出来，

若标记基因中有目的基因插入，则标记基因被破坏，无法进

行筛选。;3.将目的基因导入

受体细胞;【教材拾遗】（选择性必修3P81资料卡）农杆菌细胞内含有Ti质

粒，当它侵染植物细胞后，能将目的基因导入受体细胞并整合到染

色体的DNA上，原因是农杆菌能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染

的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。;4.目的基因的检测与鉴定;;4.（选择性必修3P80旁栏思考）生物的所有DNA通过注射或花粉管

通道法转入植物细胞中，就可获得具有理想性状的转基因植物。

（×）;;（1）PCR技术为什么需要引物？;（4）为检测胚乳细胞中Wx基因是否表达，科研人员提取胚乳中的

总RNA，经逆转录过程获得总cDNA，通过PCR技术可在总

cDNA中专一性地扩增出Wx基因的cDNA，原因是什么？;【归纳总结】

PCR扩增过程中的循环图示与规律;循环次数;2.构建基因表达载体时，需要选择合适的限制酶切割含有目的基因的

DNA片段和载体。

已知限制性内切核酸酶Ⅰ的识别序列和切点是

↓

—GGATCC，限制性内切核酸酶Ⅱ的识别序列和切点是

↓

—G