一种脂肪间充质干细胞外泌体冻干粉-2021.docx

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN114262364A

(43)申请公布日2022.04.01

(21)申请号202111640017.X

(22)申请日2021.12.29

A61Q19/00(2006.01)

(71)申请人北京戴域生物技术有限公司

地址100000北京市怀柔区融城北路10号院72号楼7层701

(72)发明人王京陈帅

(51)Int.Cl.

C07K14/00(2006.01)A61K35/28(2015.01)A61K9/19(2006.01)A61K47/42(2017.01)A61P17/02(2006.01)A61K8/99(2017.01)A61K8/64(2006.01)A61K8/02(2006.01)A61Q19/08(2006.01)

权利要求书1页说明书7页序列表1页附图1页

(54)发明名称

一种脂肪间充质干细胞外泌体冻干粉(57)摘要

CN114262364A本发明涉及一种脂肪间充质干细胞外泌体冻干粉，本发明针对已有的抗冻蛋白进行设计和改构，获得了2个具有较好活性的抗冻蛋白突变体L11K和E17N，所述突变体可以较好的用于外泌体的冻干保护，制备的所述冻干粉具有极高的保护率以及促进成纤维细胞增殖的能力，对于皮肤疤痕愈合以及皮肤抗皱均具有较好的效果，前景

CN114262364A

CN114262364A权利要求书1/1页

2

1.一种改构的抗冻蛋白，所述抗冻蛋白的序列如SEQIDNO：2所示。

2.权利要求1所述的抗冻蛋白在制备外泌体冻干粉的用途，其中，所述冻干粉的制备方法为：人间充质干细胞外泌体10g，加入1g份甘露糖醇、权利要求1中所述的抗冻蛋白，1g海藻糖，0.1g甘氨酸，混匀后，依次经0.45μm、0.22μm的微孔膜过滤后，液氮速度10min，随后在温度为-65℃,冷冻压力为10Pa的真空度的条件下冷冻真空干燥35h，得到脂肪间充质干细胞外泌体冻干粉。

3.权利要求2所述用途制备得到的外泌体冻干粉在制备促进成纤维细胞增殖的药物中的用途。

4.权利要求2所述用途制备得到的外泌体冻干粉在制备促进成纤维细胞增殖的药物中的用途。

5.权利要求2所述用途制备得到的外泌体冻干粉在制备促进皮肤抗衰老增加表面含水量的面膜中的用途。

CN114262364A说明书1/7页

3

一种脂肪间充质干细胞外泌体冻干粉

技术领域

[0001]本发明涉及一种改构的抗冻蛋白，更具体的涉及一种脂肪间充质干细胞外泌体冻干粉。

背景技术

[0002]间充质干细胞属于多能干细胞，间充质干细胞有很多种类，目前能够从骨髓、脂肪、羊水、脐带血等组织中分离提取间充质干细胞，近年来，因其具有多分化潜能、免疫调节和自我复制及多种生物活性物质的分泌能力等特点而逐渐引起人们的关注，可作为理想的种子细胞用于组织器官的损伤修复以及皮肤美容化妆品的制备。

[0003]外泌体是一种脂质分子膜包裹的小囊泡，直径约为70～160nm。外泌体来源于细胞核内体系统，由多囊泡体内陷腔化形成并通过多囊泡体与细胞膜融合而释放到细胞外环境中。最早于1983年有研究人员发现了外泌体的释放，但直到发现外泌体转运包括microRNAs、功能性蛋白质等生物活性因子才激起了人们的兴趣。自此，对于外泌体研究的兴趣持续增加。研究方向包括了外泌体作为细胞间信号介质、疾病生物标志物、药物转运载体或者治疗的制剂。外泌体包括脂质、膜、胞质蛋白以及microRNA等物质。这些成分使得外泌体成为细胞间通讯的重要途径。外泌体是旁分泌的一个重要组成部分，它提供了一种非传统非接触的长距离细胞间通讯方式，越来越多的实验证实，间充质干细胞通过旁分泌外泌体，促进表皮细胞的迁移和生长。除此以外，外泌体还具有免疫抑制的功能，能调节免疫细胞中各种炎症因子的分泌如白细胞介素IL-6/IL-10、肿瘤坏死因子TNF等，而又因其半衰期较长，可考虑作为临床疾病的无创或微创诊断手段，有效减少患者的痛苦，也可很方便的用于制备化妆品用于美容。

[0004]正是基于外泌体的重要作用，分离制备以及保存外泌体变得尤为重要。实验室中常规的外泌体存储条件一般是4℃、-20℃、-80℃。在一项研究中，研究者评估了储存在4℃,-20℃和-80℃下长达28天的外泌体的稳定性，并将其与新鲜的