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基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测标准

1范围

本标准规定了基于第二代测序技术的HLA高分辨分型的检测对象、受检者资料和样本的采集、实验室工作程序、检测报告、受检者资料和样本的保存、质量控制的要求。

本标准适用于使用第二代测序技术进行HLA高分辨分型检测的机构，对外周血、脐血、口腔拭子或全基因组DNA进行基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测。

2缩略语

下列缩略语适合于本标准。

bp：碱基对（basepair）

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

HLA：人类白细胞抗原（HumanLeukocyteAntigen）

HTS：高通量测序（High-throughputsequencing）

NGS：第二代基因测序技术（NextGenerationSequencing）

PCR：聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）

Q-PCR：定量聚合酶链反应（QuantitativePolymeraseChainReaction）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

SBT：基于基因测序的分型法（SequencingBasedTyping）

SNP：单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphisms）

SSP：特异性序列引物（SpecificSquencePrimer）

A：腺嘌呤（Adenine）

T：胸腺嘧啶（Thymine）

G：鸟嘌呤（Guanine）

C：胞嘧啶（Cytosine）

U：尿嘧啶（Uracil）

Sanger：双脱氧链终止法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

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3.1HLA基

因

人类白细胞抗原基因，其编码基因位于人类16号染色体短臂，长约3600KB，根据功能和产物结构的不同，分成3组：经典HLA基因、免疫功能相关基因和免疫无关基因。其中经典HLA基因与输血和移植急性排斥反应密切关联。因此，对于经典的HLA基因进行分型在临床上有重要意义。

3.2HLA高分辨分型

即从基因序列水平对HLA进行分型的技术，其结果精确到血清学水平后的亚型。HLA高分辨分型与过去的低分辨分型相比配型速度更快，配型更精确，使得移植排斥反应更小，手术成功率和术后存活率更高。

3.3第二代测序技术

基于第一代sanger测序技术、利用边合成边测序原理，通过捕捉新合成的末端的标记来确定

DNA序列的一种新的测序技术，在Sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP，当DNA聚合酶合成互补链时，每添加一种dNTP就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测DNA的序列信息。第二代测序技术具有通量高、成本低等特点，能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定。

3.4碱基对

碱基对是一对相互匹配的碱基，被氢键连接起来，组成碱基对的碱基包括A、T、G、C、U；是形成DNA、RNA单体以及编码遗传信息的化学结构。

3.5覆盖深度值

用来衡量来源于特定染色体的DNA量的值。如16号染色体上的覆盖深度值为样本定位到16号染色体的DNA分子数目与人类基因组上的16号染色体上的有效片段数的比值。

4检测工作程序

4.1检测对象

临床具有造血干细胞移植、器官移植HLA配型需求的供患者，骨髓库、脐血库等有造血干细胞HLA配型数据入库需求的机构的样本。

4.2受检者资料和样本的采集、运输与保存

4.2.1资料收集

4.2.1.1受检者基本资料：包括受检者个人信息、送检单位信息和受检者当前临床诊断结果。见附录A

4.2.1.2供患关系：亲缘或非亲缘供患关系。

4.2.1.3检测项目：根据临床需要选择需检测位点。

4.2.1.4受检者既往病史：包括免疫治疗史和输血史。

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4.2.2样本采集、运输与保存

4.2.2.1外周血样本

4.2.2.1.1抽血前，除必须服用的药物外不得服用其他药物（例如化疗药物），以避免或减轻因白细胞的数量较少影响实验结果。

4.2.2.1.2严格按照无菌操作常规，用静脉穿刺术抽取患者外周血4mL（2mL/管×2管）注入于EDTA（乙二胺四乙酸）或枸橼酸钠抗凝管中，并缓慢翻转抗凝管让血液与抗凝剂混合。