1.2.2微生物的培养技术与运用上课课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

二、微生物的纯培养和计数

纯培养：获得由单一个体繁殖所得的微生物群体(单菌落)的过程。微生物群分散或稀释单个细胞繁殖单菌落酵母菌的纯培养原理：方法：平板划线法和稀释涂布平板法不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。

材料用具：微生物纯培养过程包括：配置培养基、（调PH、分装）、灭菌、倒平板、接种和分离、培养等步骤

031、制备培养基配制培养基灭菌倒平板

倒平板待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。具体操作步骤如下。1.拔出锥形瓶的棉塞。2.将瓶口迅速通过火焰。3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10?20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。不要完全打开，以免杂菌污染培养基低于44℃会凝固，温度太高会烫手倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置1、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？①可以防止皿盖上的水珠落入培养基，②可以避免培养基中的水分过快蒸发。

问题思考与分析：问1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。2.将制备的空白平板，置于恒温培养箱中培养一段时间，平板上长出了菌落，可能的原因是？培养基灭菌不彻底或接种过程中受到杂菌污染

第二步：接种和分离酵母菌1.方法：平板划线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。单个细胞微生物群单个菌落连续划线稀释分散生长繁殖将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面

平板划线的具体操作步骤①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞。③将试管口通过火焰④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液。⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。酵母菌的纯培养以免接种环温度太高，杀死菌种。随着划线次数的增加而菌种的数量逐步减少杀死接种环原有微生物，以免污染培养基。划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染.

3、酵母菌培养完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-48h。用记号笔标记培养皿中菌落皿底上平板划线法可以对菌种进行分离，不能对培养液中菌种进行计数细菌：37℃警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。

第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌12345①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次②划线首尾不能相接③每次划线前对接种环进行灼烧灭菌④划线后,培养皿倒置培养。划线操作结束后，仍需灼烧接种环平板划线法注意事项:第4区划线平板划线法如图所示，接种环共需灼烧几次？6次

灼烧时期目的①取菌种前②每次划线前③接种结束后杀死接种环上原有微生物，以免污染培养基。杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端。从而通过划线次数的增加，每次划线时菌种的数量逐渐减少，以便得到单个菌落。杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？以免接种环温度太高，杀死菌种。灼烧接种环的目的:

纯培养：获得由单一个体繁殖所得的微生物群体(单菌落)的过程。微生物群稀释分散单个细胞繁殖单菌落土壤微生物的纯培养原理：方法：稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061ml107(1)样品梯度稀释：2.土壤微生物纯培养的操作过程：将10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的是试管中，依次等比稀释。90mL无菌水10110g土样

(2)取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。(1)将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。(3)将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。待涂布的菌液被