《医学免疫学》补体介导的细胞毒实验-教学课件（非AI生成）.pptx

补体介导的细胞毒实验

Complementmediatedcytotoxicitytest

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Outline

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实验原理

Ag(ontargetcells)+Ab+complementcelllysis

Thy-1抗原

小鼠胸腺T细胞

anti-Thy-1

取自豚鼠血清

细胞膜通透性增加

死细胞被染料着色

小鼠胸腺T细胞

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实验材料

1试剂

抗小鼠Yhy-1的单克隆抗体，补体（豚鼠新鲜血清并经小鼠胸腺细胞吸收，预先测定效价并稀释为最佳稀释度），含5%NBS的冷Hank液，1%伊红-Y染液。

2器械（仪器）

解剖器械（眼科剪、眼科镊），平皿。80~100目不锈钢网，试管，1ml吸量管，尖吸管，载玻片，盖玻片

3实验动物

[C57BL/6]小鼠（4周）

4

Outline

5

实验步骤

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补体的提取

豚鼠心脏取血

血清的析出与处理

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胸腺细胞悬液的制备

取小鼠胸腺

分离细胞

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配制反应体系

实验材料

试验管

补体对照管

细胞对照管

1×107/ml胸腺细胞悬液

0.1ml

0.1ml

0.1ml

Thy-1单克隆抗体

0.1ml

——

——

Hank’s液

——

0.1ml

0.2ml

1：3补体

0.1ml

0.1ml

——

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10

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显微镜检结果

项目

试验组

补体对照管

细胞对照管

死细胞

50

4

6

活细胞

0

46

44

总数

50

50

50

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结论与讨论

死细胞百分数

对照组死亡率过高

血清要经胸腺细胞吸收的原因

观察到了补体介导的细胞毒效应

证明了该效应需要抗体的参与

死细胞百分数=（实验管死细胞数%-对照管死细胞数%）

(100%-对照管死细胞数%)

=（100-8）/(100-8)=100%

计数问题！

吸附豚鼠的IgG

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