畜禽肉品中9中生物胺含量的测定--液相色谱-串联质谱（LS-MSMS）法.docxVIP

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畜禽肉品中9种生物胺含量的测定液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法

1范围

本文件描述了畜禽肉品中9种生物胺的液相色谱-串联质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、试验数据处理、回收率、精密度等内容。

本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉和鹅肉中9种生物胺的测定。本文件9种生物胺的方法检出限为0.5mg/kg，方法定量限为1mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的生物胺经5%三氯乙酸溶液振荡提取两次，正己烷液液萃取除去脂肪，丹磺酰氯衍生，C18色谱柱分离，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯。

5.1水：GB/T6682，一级。

5.2乙腈（色谱纯）。

5.3三氯乙酸。

5.4丙酮（色谱纯）。

5.5正己烷（色谱纯）。

5.6浓氨水。

5.7碳酸氢钠。

5.8碳酸钠。

5.9氢氧化钠。

5.10浓盐酸（色谱纯）。

5.11丹磺酰氯（纯度≥98%）。

5.12乙酸乙酯（色谱纯）。

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5.13三氯乙酸溶液（5%）：称取10g三氯乙酸于250mL锥形瓶中，加入200mL去离子水，超声充分溶解后备用。

5.14氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4g氢氧化钠，加入100mL水完全溶解。

5.15碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液：称取18.7g碳酸钠以及1g碳酸氢钠于500mL锥形瓶中，加入300mL水溶解，用1mol/LNaOH溶液调节pH至11.5。

5.16丹磺酰氯丙酮溶液（10mg/mL）：准确称取100mg丹磺酰氯粉末于15mL离心管中，加入10mL丙酮溶解，现用现配。

5.17盐酸溶液（0.1mol/L）：吸取8.3mL12mol/L浓盐酸于1000mL容量瓶中，用水定容，混匀。密封待用。

5.18甲酸水溶液（0.1%）：在800mL的水中加入1.0mL甲酸，加水定容至1000mL，混匀。

5.19标准物质：9种生物胺标准物质的英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式见附录A中表A.1,各种标准物质的纯度均不小于97%。

5.20混合标准中间工作液：分别准确称取适量标准物质（5.19）（精确至0.1mg），用0.1mol/L盐酸溶液（5.17）配制成质量浓度为10mg/mL的单标标准储备液（于-18℃以下避光保存，有效期6个月，以生物胺的单体计，若所用标准品为相应的盐或含结晶水，应折算成有效成份）；准确移取各单标标准储备液0.1mL，置于10mL棕色容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液（5.17）定容，制得混合标准中间工作液（各为100μg/mL，-18℃以下避光保存，有效期3个月）。

5.21陶瓷均质子。

5.22滤膜：孔径为0.22μm的聚四氟乙烯滤膜。

6仪器设备

6.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

6.2天平：感量0.01g。

6.3分析天平：感量0.00001g。

6.4往复式振荡器。

6.5低温离心机：最高转速不低于8000r/min，温度可调至0℃~4℃。

6.6涡旋振荡器。

6.7恒温水浴振荡器：温度可调至0℃~100℃。

6.8氮吹仪。

6.9pH计：精度±0.1。

7试验步骤

7.1试样处理

称取5g（精确至±0.05g）试样，置于50mL具塞塑料离心管中，加入两粒陶瓷均质子，加入15mL5%三氯乙酸提取液（5.13），盖好盖子，手动快速上下振荡使样品组织分散，用往复式振荡器振荡提取15min后，于不低于8000r/min下离心10min。将离心后的上清液转移至50mL容量瓶中。残渣再重复提取一遍，合并上清液，混匀，定容至刻度。准确移取上述溶液10.0mL，置于50mL具塞塑料离心管中，加入10mL正己烷（5.5），涡旋5min，于不低于5000r/min低