生物化学检验技术 课件 第七章 糖代谢紊乱检验.ppt

2．HbA1c免疫法【实验原理】首先用TTAB(四癸基三甲铵溴化物）作为溶血剂(不溶解白细胞)，用来消除白细胞物质的干扰。将处理好的样本先加入抗体缓冲液，样本中的糖化血红蛋白(HbA1c)和抗HbA1c抗体反应形成可溶性的抗原-抗体复合物，由于在HbA1c分子上只有一个特异性的HbA1c抗体结合位点，不能够形成凝集反应。然后，加入多聚半抗原缓冲液，多聚半抗原和反应液中过剩的抗HbA1c抗体结合，生成不溶性的抗体-多聚半抗原复合物，可用比浊法进行测定。同时在另一个通道上测定Hb浓度。在该通道中，溶血液中的血红蛋白转变为具有特征性吸收光谱的血红蛋白衍生物，用重铬酸盐作标准参照物，进行比色法测定Hb浓度。（一）测定方法【参考区间】（1）IFCC计算方案：健康成年人:HbA1c：2.8%～3.8%（2）DCCT/NGSP（糖尿病控制和并发症试验/美国糖化Hb标准化方案)计算方案：健康成年人：HbA1c4.8%～6.0%（一）测定方法第一步：在蛋白酶的作用下，切断糖化血红蛋白的β链N末端的糖化甘氨酰谷氨酰胺，通过测定600nm与800nm的吸光度差，求出Hb的浓度;第二步:果糖基氨基酸氧化酶(FPOX)作用于糖化甘氨酰谷氨酰胺，在过氧化物酶的存在下，生成的过氧化氢与显色剂产生显色反应，通过吸光度求出HbA1c的浓度，进一步计算得出HbA1c(％)。反应式如下：1.是糖尿病患者长期血糖控制的评价指标：4％～6％:血糖控制正常6％～7％:血糖控制比较理想。7％～8％:血糖控制一般8％～9％:控制较差，需注意饮食结构及运动，在医生指导下调整治疗方案。＞9％:血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素。并有可能出现酮症酸中毒等急性并发症（二）临床意义HbA1c≥6.5％：糖尿病患者；HbA1c在5.7％～6.4％之间：属于糖尿病前期。2．对糖尿病性高血糖和应激性高血糖做出鉴别：前者GHb水平多增高，后者正常。3．HbA1c水平低于确定的参考区间，可能表明最近有低血糖发作、Hb变异体存在或红细胞寿命短，减少或缩短了红细胞暴露到葡萄糖中的时间。当解释此类患者的HbA1c结果时应当小心。4．GHb对监测糖尿病微小血管并发症、慢性并发症的发生和发展都有积极的意义。若GHb＞9%说明患者有持续性高血糖存在，会发生糖尿病肾病、白内障等，同时也是AMI、脑卒中死亡的高危因素。（二）临床意义四、糖化血清蛋白测定糖化血清蛋白是指血液中的葡萄糖与血清蛋白的N末端发生非酶促的糖基化反应，形成高分子酮胺化合物，其结构类似果糖胺，总称为糖化血清蛋白。由于90％以上糖化血清蛋白是糖化白蛋白(glycatedalbumin，GA)，即葡萄糖与白蛋白链内赖氨酸残基上的ε-氨基结合生成，因此GA可以反映糖化血清蛋白的总体水平。什么是糖化血清蛋白？白蛋白的半寿期为17～19天，比血红蛋白短，转换率快，故可通过测定GA水平来反映受试者2～3周前的血糖控制情况，是一个短期血糖控制的评价指标。为什么要测糖化血清蛋白？（一）测定方法目前临床常用：果糖胺法、酮胺氧化酶法【实验原理】血清中的果糖胺，在碱性环境下能还原硝基四氮唑蓝(NBT)为紫红色甲臜，在530nm波长处有最大吸收峰,与同样处理的果糖胺标准液进行比较，即可计算出样本中糖化血清蛋白的含量。【参考区间】成人果糖胺：1.9mmol/L±0.25mmol/L【方法评价】该法经济、快速，适用于自动生化分析仪，但pH、反应温度、反应时间，对本实验影响较大，必须严格予以控制。血液中的胆红素、乳糜和低分子物质会对测定造成干扰。（一）测定方法1、果糖胺法【实验原理】（一）测定方法2、酮胺氧化酶法蓝紫色色素生成量在一定范围内与GA含量成正比，通过测定吸光度值来定量GA；同时采用溴甲酚绿法测定血清总白蛋白的含量，从而计算出糖化白蛋白占总白蛋白的百分比。【参考区间】成人糖化白蛋白：10.8％～17.1％(引自2011年《中国血糖监测临床应用指南》)【方法学评价】本法简便快捷，可运用于自动生化分析仪，精密度、准确度优于果糖胺法，而且胆红素、甘油三酯、抗坏血酸、尿酸、血红蛋白及葡萄糖等对其干扰较小。该法与HPLC参考方法有极好的相关性。（一）测定方法1、评价短期血糖控制情況：白蛋白在体内半寿期较短(约20天左右)，且白蛋白与葡萄糖结合的速度比血红蛋白快，故GA可有效地反映糖尿病患者近2～3周内血糖控制情況，特