生物化学检验技术 课件 第三章 生物化学检验常用分析技术与仪器自动化.pptx

职业教育医学检验技术专业教学资源库;;;第一节常用分析技术;;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;一、光谱分析技术;

分子、原子或离子在辐射能的作用下，由基态或低能态跃迁到激发态，当它们返回基态或低能态时，以辐射的形式释放出能量，由此而产生的光谱

;一、光谱分析技术;;18;一、光谱分析技术;（一）离心技术的原理

;离心是利用离心机产生的强大离心力来分离具有不同沉降系数的物质。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态、密度、重力场的强度及液体的黏度有关。;1.离心力

当物体所受外力小于运动所需要的向心力时，物体将向远离圆心的方向运动。物体远离圆心运动的现象称为离心现象。也叫离心运动。离心运动是由于向心力消失或不足而造成的。;2.相对离心力

相对离心力是指在离心力场中，作用于颗粒的离心力相对于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g”。

RCF=1.118×10-5n2r

式中r为离心转子的半径距离，以cm为单位；n为转子每分钟的转数（rpm）。

;3.沉降速度指在强大离心力作用下，单位时间内物质运动的距离。

4.沉降时间在离心机的某一转速下把溶液中某一种溶质全部沉降分离出来所需的时间即沉降时间。

5.沉降系数颗粒在单位离心力场作用下的沉降速度，其单位为秒。沉降系数与样品颗粒的分子量、分子密度、组成、形状等有关，样品颗粒的质量或密度越大，它所表现出的沉降系数也越大。

;（二）离心技术的方法

1.差速离心法

差速离心法是利用不同的粒子在离心力场中沉降系数的差别，在同一离心条件下，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分步沉淀的离心方法。主要用于一般及特殊样品的分离，例如分离细胞器和病毒。

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操作过程一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开，然后将上清液加高转速离心，分离出第二部分沉淀，如此反复加高转速，逐级分离出所需要的物质（如左图所示）。;二、离心技术;2.密度梯度离心法

样品在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡，在一定离心力作用下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。

;（1）速率区带离心法

速率区带离心法是根据被分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同，离心后分别处于不同的密度梯度层内形成几条分开的样品区带，达到彼此分离的方法。

;（2）等密度区带离心法

当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场中，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直沿梯度移动到它们密度恰好相等的位置上（即等密度点）形成区带，故称为等密度区带离心法。

;操作中，一般是将被分离样品均匀分布于梯度液中，离心后，粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带，收集好所需区带即为纯化的组份。

主要用于科研及实验室特殊方面的样品组份的分离和纯化。

;二、离心技术;;（一）离子选择电极分析法的基本原理

离子选择电极是一类用特殊敏感膜制成，对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化学传感器。一般由敏感膜、内参比电极、内参比溶液和电极管组成，既可测定pH，也可测定Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+等离子活度或浓度。通常以离子选择性电极作为指示电极，饱和甘汞电极作为参比电极，插入被测溶液中构成原电池，通过测量原电池的电动势来求得被测离子活度或浓度。;ISE与参比电极共同浸入样品试液中构成一个原电池，通过测量原电池的电动势E，便可求得被测离子的活度或浓度。

;（二）常用的离子选择电极

;（三）离子选择性电极分析法测定的影响因素

;溶液中带电粒子在电场中定向移动的现象称为电泳;（一）电泳技术的基本原理

物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场

中它们的移动方向和移

动速度也不同，因此可

使它们分离。

;电泳迁移率;;（二）常用电泳技术的分类;四、电泳分析技术;（三）电泳技术在临床检验中的应用

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指将液态样品如血浆、血清、尿液等置于含有试剂的固相载体上发生反应，依照反应结果定量测定样品中特定成分的浓度或活度的一项技术;（一）干化学分析技术的基本原理

;47;48;基于传统湿化学分析的离子选择电极原理，用于测定无机离子;五、干化学分析技术;五、干化学分析技术;52;53;六、自动生化分析技术;六、自动生化分析技术;;1.分立式自动生化分析仪;样本针;（1）样本和试剂处理系统

1）样本