2025版高考生物二轮复习 课时4 突破基因工程类大题.doc

课时4突破基因工程类大题

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热点

考情

RT－RCR、实时荧光定量、PCR与反向PCR

①2022·全国乙卷，38；②2022·江苏卷，24；

①2020·江苏卷，33；②2020·山东卷，25

PCR定点诱变技术

①2023·辽宁卷，25；①2021·天津卷，16

单酶切导致的正、反接的电泳检测和PCR检测

①2024·黑吉辽卷，17、25；②2024·全国甲卷，38；③2024·河北卷，24；④2024·湖南卷，15；⑤2024·江西卷，12；⑥2024·浙江6月选考，19、20；

①2023·山东卷，25；①2022·福建卷，13

突破1基因工程的热考题型

题型一限制酶的选择技巧

(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点选择限制酶

①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。

②为避免目的基因和质粒的自身环化和反向连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点，如图乙)

(2)根据质粒的特点选择限制酶(如图)

[例1](2024·巴蜀中学适应考)科学家从大量木乃伊中获得少量木乃伊DNA，进行克隆，复制了2400年前的DNA。某生物兴趣小组同学模拟了其中部分研究过程，设计了如下实验(MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ为4种限制性内切核酸酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG)。请回答以下问题：

(1)从解旋过程进行分析，PCR扩增木乃伊基因与体内DNA复制过程不相同的地方是_______________________________________________________________

________________________________________________________(答出两点)。

(2)若将图乙中质粒和图甲中木乃伊基因通过同种限制酶处理后，构建重组质粒，应选用的限制酶是________，选择理由是_______________________________

___________________________________________________________________。

(3)经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因不能正确表达，最可能的原因是_______________________________________________________

________________________________________________________________。

(4)据图丙分析，培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A、B还应分别含有________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是________菌落中的细菌。

答案(1)PCR扩增是完全解旋后进行复制，在高温条件下解旋，不需要解旋酶，而体内DNA复制是边解旋边复制，需要解旋酶解旋

(2)BamHⅠ用BamHⅠ来切割目的基因和质粒，切割后能保留完整的目的基因和标记基因(合理即可)

(3)同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接

(4)青霉素、四环素4和6

解析(1)PCR扩增是完全解旋后进行复制，在高温条件下解旋，不需要解旋酶，而体内DNA复制是边解旋边复制，需要解旋酶解旋。(2)能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为G↓GATCC的BamHⅠ和识别序列为↓GATC的MboⅠ，若使用MboⅠ会同时破坏质粒中的青霉素抗性基因和四环素抗性基因，所以要用BamHⅠ来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的青霉素抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌。(3)因为目的基因和载体是用同种限制酶切割的，同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接，导致目的基因不能正确表达。(4)用限制酶BamHⅠ对质粒进行切割时，会破坏四环素抗性基因，但不会破坏青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的大肠杆菌能在含有青霉素的培养基上生存，但不能在含有四环素的培养基上生存。所以图丙培养基A和培养基B还应分别含有青霉素、四环素。从检测筛选的结果分析，培养基A中含有菌落4和6，培养基B中不含菌落4和6，故含目的基因的是4和6菌落中的细菌。

题型二PCR中引物的设计与选择

利用PCR扩增目的基因(如干扰素基因)时，设计引物序列的主要依据是有一段已知目的基因(干扰素基因)的核苷酸序列。所以引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。

(1)引物的作用：TaqDNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链。当引