3.沉淀近年原文.ppt

沉析

Precipitation何谓沉析？概念：利用沉析剂使所需提取的生化物质或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。特点：①具有浓缩和分离的双重作用。②操作简单、经济、浓缩倍数高。③应用广泛。缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强，是一种初级分离技术。盐析沉淀沉析法有机溶剂沉淀等电点沉淀其他沉淀法水溶性非离子型聚合物沉淀剂成盐类复合物沉析剂离子型表面活性剂离子型多聚物沉析剂氨基酸类沉析剂分离核酸用沉析剂分离粘多糖用沉析剂选择性变性沉析法盐析(Saltinducedprecipitation)概念：在高浓度的中性盐存在下，欲分离物质在中性盐水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。目前，广泛应用于回收或分离蛋白质（酶）等生物大分子。优点：①不会使生物活性丧失；②非蛋白物质不会沉淀；③适用范围广；④设备简单、操作方便。缺点：沉淀物中含大量盐析剂，要用超滤、透析、凝胶层析脱盐。盐析原理首先需要了解生物大分子在水溶液中的存在状态：两性电解质，由于静电力的作用，分子间相互排斥，形成稳定的分散系蛋白质周围形成水化膜，保护了蛋白质粒子，避免了相互碰撞当中性盐加入蛋白质分散体系时可能出现以下两种情况：（1）“盐溶”现象—低盐浓度下，随着中性盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大（2）“盐析”现象—高盐浓度下，蛋白质溶解度随之下降，原因如下：A.中和电荷——无机离子与蛋白质表面电荷中和，形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间的排斥力减弱，从而能够相互靠拢；B.破坏水膜——中性盐的亲水性大，使蛋白质脱去水化膜，疏水区暴露，由于疏水区的相互作用导致沉淀；离子强度对盐析过程的影响Cohn经验公式S—蛋白质溶解度，g/L；β，Ks—常数I—离子强度c：离子浓度；Z：离子化合价β和Ks的物理意义β—当盐浓度为0时，蛋白质溶解度的对数值。为纵轴延伸的截距，与蛋白质种类、温度、pH值有关，与盐无关；Ks—盐析常数，为直线的斜率，与蛋白质和无机盐的种类有关，与温度、pH值无关。以Cohn经验式将盐析分为两种类型：Ks盐析：在一定pH和温度下改变体系离子强度进行盐析的方法；β盐析法：在一定离子强度下改变pH和温度进行盐析；Ks盐析：由于蛋白质对离子强度的变化非常敏感，易产生共沉淀现象，分辨率不高，因此常用于前期处理。β盐析：由于溶质溶解度变化缓慢，且变化幅度小，因此分辨率更高，常用于结晶。选用盐析用盐的几点考虑 盐析作用要强需有较大的溶解度，温度影响小必须是惰性的，不影响生物活性来源丰富、经济常用的盐析用盐硫酸铵：价廉、溶解度大（767g/L）、温度变化小、不影响活性。硫酸钠：不含氮，不影响定氮法测定蛋白质含量，溶解度随温度变化大。磷酸盐、柠檬酸盐：缓冲液作用，溶解度低，易与金属离子形成沉淀。盐析用盐的用量选择饱和度的概念：饱和溶液体积占混合后溶液总体积的百分数。以硫酸铵为例：250C时，硫酸铵的饱和溶解度是767g/L，定义为100%饱和度。饱和硫酸铵溶液体积计算：X=VS/（1-S）X=V（S2