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液体菌种生产技术规程第9部分：桑黄

1范围

本标准规定了桑黄液体菌种术语及定义、生产的基本要求、主要包括制作要求、生产工艺流程、质量要求、技术要求、生产记录与存档等技术要求。

本标准适用于桑黄液体菌种的生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB150.1压力容器第1部分：通用要求

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB5749生活饮用水卫生标准

GB12728食用菌术语

GB50073洁净厂房设计规范

NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1731食用菌菌种良好作业规范NY/T2375食用菌生产技术规范

3术语和定义

GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1

液体菌种Liquidstrain

用液体基质培养的菌种即为液体菌种。3.2

发酵罐fermentationbioreactor

一种生物反应器，是指为活细胞或酶提供适宜的反应环境，让他们进行细胞增殖或生产的装置系统。3.3

发酵罐空消emptyfermentersterilization

是指在发酵罐内没有放发酵液时，对整个空的罐体进行灭菌消毒。

3.4

发酵罐实消fermentersterilization是指加入培养基后消毒灭菌。

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4生产要求

生产要求应符合NY/T528的规定。环境要求应符合NY/T1731的规定。液体种发酵罐质量应符合

GB150.1的规定。生产用水标准应符合GB5749的规定。

4.1环境条件

应符合NY/T528的规定。

4.2生产车间

应符合GB50073的规定。

4.3生产原料

培养基生产用水应符合GB5749的要求，化学投入品应符合NY/T2375要求，天然材料要求新鲜、无霉变、无螨、无虫、洁净、干燥。

4.4菌种选择

选用菌丝生长旺盛、高产、优质、抗逆性强的菌种。

5生产工艺

5.1母种制备

5.1.1培养基配方

马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂粉20g，水1000mL。

5.1.2母种培养基制作

取新鲜去皮马铃薯200g切成小块，加水煮沸20?30min，然后用纱布过滤，补充水至1000ml，加入琼脂加热搅匀，充分溶解后加入葡萄糖、磷酸二氢钾和硫酸镁，溶解后分装至试管，分装量为试管长度的1/3～1/2，使用硅胶塞封口，将试管置于高压蒸汽灭菌锅中，0.1Mpa灭菌30min，冷却后摆放斜面。

5.1.3接种与培养

在无菌条件下，用接种工具取黄豆粒大小的初始菌种接种至母种培养基中，24℃~26℃避光培养，菌丝长满斜面后检验合格即可使用。

5.1.4母种质量要求

培养期间每天检查，及时淘汰染菌或劣势菌种。菌丝长满管后逐支进行感官和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生产流程。

5.2液体菌种配方

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表1液体菌种培养基配方

配方1

葡萄糖20g/L、豆粕粉5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸镁1g/L，pH自然

配方2

玉米粉20g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L，pH自然

配方3

玉米粉20g/L、豆粕粉5g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L，pH自然

5.3摇瓶液体菌种生产

5.3.1培养基配制

按液体培养基配方配制，混合均匀，装入250mL、500mL或1000mL无色玻璃三角瓶中，装液量宜为摇甁容量的1/4～1/3，瓶塞封口，并用报纸或牛皮纸包扎，置于高压蒸汽灭菌锅中，在0.1Mpa下灭菌25min～30min。

5.3.2接种

待培养基冷却至25℃以下，在无菌条件下，用接种工具挑取取块径3mm～5mm的菌块迅速转接于摇甁培养基内，封口。

5.3.3培养

24℃~26℃条件下，静置培养24h，然后置于摇床上震荡暗光培养，转速150r/min～160r/min，培养时间6d～9d。

5.3.4摇瓶液体菌种质量要求

菌液澄清透明，菌球均匀密集，无异味，镜检无杂菌、菌丝形态正常。

5.4发酵罐液体菌种生产

5.4.1培养基配制

将配制好的培养基材料搅拌均匀，倒