葡萄酒中 4 种羟基肉桂酸类物质的测定 高效液相色谱-串联质谱法.docx

T/NAIAXXX—2025

葡萄酒中4种羟基肉桂酸类物质的测定高效液相色谱-串联质谱

法

1范围

本文件规定了葡萄酒中绿原酸、对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸4种羟基肉桂酸的高效液相色谱-质谱检测方法。

本文件适用葡萄酒中绿原酸、对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸4种羟基肉桂酸的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法提要

试样经水溶液涡旋震荡提取，取上清液，经分散固相萃取净化，反相色谱柱分离，以保留时间定性，供高效液相色谱-质谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。

5.1.2甲醇：色谱纯。

5.1.3甲酸：色谱纯。

5.1.40.1%甲酸水溶液：取甲酸（5.1.3）1.0mL，用水定容到1000mL，摇匀。

5.1.50.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（5.1.3）1.0mL，用乙腈（5.1.1）定容到1000mL，摇匀。

5.1.6十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）粉末：粒径50μm。5.2标准品

标准品：咖啡酸（Caffeicacid，CAS号331-39-5，C9H8O4）、对香豆素酸（p-Coumaricacid，CAS号501-98-4，C9H8O3）、绿原酸（Chlorogenicacid，CAS号327-97-9，C16H18O9）、阿魏酸（Ferulicadid，CAS号1135-24-6，C10H10O4），纯度均≥95%。

5.3标准溶液配制

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5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取绿原酸、对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸标准品10mg（准确至0.1mg），于10mL容量瓶中，分别用甲醇（5.1.2）溶解并定容至刻度，4℃保存。

5.3.2混合标准中间液（100μg/mL）：分别准确吸取绿原酸、对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸标准储备液（5.3.1）各1.0mL于10mL容量瓶中，用纯水定容。

5.3.3混合标准使用液：分别准确吸取混合标准储备液（5.3.2）适量，纯水配制成浓度为20.0ng/mL~500.0ng/mL的标准工作液，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。

6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4离心机：最大转速10000r/min。

6.5超声波发生器。

6.6水相微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。

7分析步骤

7.1试样制备

取代表性样品摇匀分装，密闭常温或冷藏保存。

7.2试样的提取

称取试样5.0g（精确到0.01g）置于50mL离心管中，加入10mL水，超声提取10min。取2mL提取液加入含有100mgC18粉末（5.1.6）的离心管中，涡旋5min，8000r/min离心5min，取上清液经0.22μm微孔滤膜（6.6）过滤后，上机待测。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：WatersACQUITYUPLCHSST3，2.1mm×100mm，粒径1.8μm或性能相当者。

b）柱温：30℃。

c）流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：0.1%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱见表1。

d）流速：0.30mL/min。e）进样量：10μL。

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速/（mL/min）

流动相A/%

流动相B/%

0.00

0.30

85

15

1.00

0.30

85

15

5.00

0.30

45

55

7.00

0.30

15

85

8.00

0.30

85

15

10.00

0.30

85

15

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7.3.2质谱参考条件

a）离子源：电喷雾离子源（ESI）。

b）扫描方式：负离子扫描。

c）检测方式：多反应监测（MRM）。

d）离子源温度：325℃。

e）毛细管电压：3.0kV。

f）脱溶剂气流量：800L/h。

g）脱溶剂气温度：500℃。

h）碰撞器流速：0.15mL/min。i）锥孔气流速：150L/h。

j）扫描范围：40~500。

k）定性离子对、定量离子对、碰撞能量等参数参见附