免疫定性项目性能验证.pptVIP

质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。CLSIEP12-A2UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;ApprovedGuideline0102性能验证前样本的准备取决于评价者的目的。作为最低要求，检测要持续到至少用比较方法获得50个阳性样本。并且至少用比较方法获得50例阴性样本以确定此种检测方法的特异性。CLSIEP12-A2UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;ApprovedGuideline0102方法比较用样本数量准确度验证检测已知值的参考物质室间质评材料(卫生部或者CAP)厂商提供的已赋值的参考材料分析用参考方法或决定方法定值的材料。方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比对)选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半01↓02随机盲法重新分号03↓04检测样本05↓06将所有检测结果汇总填表07↓08计算评价性能指标09批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测10次.然后计算均值,SD和CV.批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV.Note:用S/CO比值进行统计计算.最好选择临界值,或弱阳性样本.判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.2.精密度验证STEP1STEP2高、中、低三个浓度的样本，在一批检测内，重复检测20次（孔），计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤10%。批内重复性的验证STEP1STEP2高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。ELISA的批间变异CV%应≤15%。批间重复性的验证取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。临床诊断的阳性病人血清；厂家提供的阳性对照；决定性参考方法检测阳性的样本；以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀释）验证方法:样本来源:3.敏感性验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。样本来源:体检样本,体检者确认符合要求后即可.NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书.比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正意义上的阴性样本.4.特异性特定病原体以外感染性疾病患者的样本。01含有干扰性物质的样本：类风湿因子（RF）阳性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素样本。02结果判断：非特定病原体感染患者样本均应为阴性。含一定浓度干扰物质的样本检测应为阴性。03特异性验证（干扰）5.CUT-OFF重复性和测定下限验证CUT-OFF重复性验证：样本浓度应接近临界值。不宜用阴性或强阳性样本。批内和批间变异验证：高、中和低三个浓度（与试剂盒说明书中所述相适应）同样一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。CLSIEP12-A2UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;ApprovedGuideline临界点的定义临界点（CUT-OFF)与试剂盒判断值（CUT-OFF值）的区别这里的临界点指的是一个处于试剂检测临界点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。010203CUT-OFF的重复性（同时包含测定下限的验证）批内变异的验证批间变异的验证(1)CUT-OFF重复性验证验证步骤制备足够40次重复检测的3份样本：分别为处于临界浓度、高于临界浓度20%和低于临界浓度20%的样本。重复检测样本40次，确定每一份样本结果为阳性和阴性的百分比。评价临界浓度是否准确