布鲁氏菌病血清学鉴别诊断及病原学核酸检测法.docxVIP

布鲁氏菌病血清学鉴别诊断及病原学核酸检测法

1范围

本文件规定了布鲁氏菌病自然感染与疫苗免疫后血清学鉴别诊断及病原学核酸检测方法。

本文件适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对布鲁氏菌(包括疫苗株)感染的鉴别诊断及临床、

外环境标本布鲁氏菌属的核酸检测，其他机构可参照本文件。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

WS233病原微生物实验室生物安全通用准则

WS269-2019布鲁氏菌病诊断

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1布鲁氏菌Bruce//a

适宜在偶蹄类哺乳类动物体内生存，也可以转移宿主进入人类及多种动物机体，并造成感染-变态

反应，从而引起机体发生布鲁氏菌病的一组微小的球状或短杆状细菌。布鲁氏菌分类见附录A。

4标本采集、保存和运输

4.1标本采集

4.1.1总体要求

4.1.1.1用于布鲁氏菌的分离培养和核酸检测的标本宜在抗菌药物治疗开始前采集。

4.1.2患者标本

4.1.2.1全血标本

用真空负压采血管采集血液标本3mL～5mL。用于核酸检测的血液标本应使用含EDTA抗凝剂的真空负

压采血管。

4.1.2.2血清标本

用无抗凝剂真空负压采血管采集血液标本3mL～5mL,室温静置，待自然凝固后2000rpm～3000rpm离心8min;如果无离心机，血标本应于4℃冷藏放置，直到血清完全析出。在无菌条件下，吸取血清至

无菌螺口管中，不应吸到红血球。

4.1.2.3脑脊液标本

行腰椎穿刺法留取脑脊液1mL～2mL,放入无菌容器中。

4.1.2.4粪便标本

3

采样管加入含30%甘油的磷酸盐缓冲液保护液的采样液，用灭菌拭子采集黄豆大小的粪便，放入无菌采样管中。

4.1.2.5其它体液标本

有关节积液、局灶性脓肿等的疑似病例，可无菌操作抽取关节液或脓汁1mL～2mL放入无菌容器中。

4.1.3动物标本

动物脾脏、肝脏、淋巴结、血液、奶样、精液、阴道分泌物、流产胎儿胃内容物等疑似感染布鲁氏菌病的动物体液或组织样品采集按照GB/T18646或NY/T1467执行。

4.1.4环境标本

4.1.4.1物表拭子

采样管加入含30%甘油的磷酸盐缓冲液保护液的采样液。用灭菌拭子充分浸润采样液，在管壁上反复挤压几下，挤出多余液体，在不同环境部位擦拭，每个部位擦拭至少5次。将拭子头浸入采样液中，把拭子头部与管壁接触几下，使样品尽量多的保存在采样液中。

4.1.4.2土壤标本

采集可能被污染的表层土壤(10cm内)不少于5份，每份约150g,放入无菌自封袋中。4.1.4.3水标本

采集可能被污染的牲畜饮水处水样3份(每份500mL)放入无菌容器中。

4.2标本保存

用于核酸检测的标本应当尽快进行检测，可在24h内检测的标本可置于2℃~8℃保存；24h内无法检测的标本则应置于-20℃及以下保存。血清标本可在4℃存放3天，-20℃以下可长期保存。

4.3标本运输

标本或菌株运输要求按卫生部2005年第45号令执行。

5半胱氨酸盐酸盐处理血清后的凝集试验(具体操作方法见附录B)

5.1器材及试剂

5.1.1器材

1mL、10mL吸管(或加样器)、洁净玻璃试管(12mm×100mm或13mm×100mm)、试管架、配制试剂用的洁净容器、37℃培养箱。

5.1.2试剂

NaOH、L-半胱氨酸盐酸盐、布鲁氏菌试管凝集抗原、半胱氨酸盐酸盐试验专用阳性血清、布鲁氏菌阴性血清、生理盐水或0.5%的石炭酸生理盐水。

5.2结果判定

5.2.1对照判定要求

血清对照为清亮透明无沉淀，抗原对照为均匀混浊。阳性对照、阴性对照均出现正确结果，在四种对照都成立的情况下，才可判定试验管，否则应重新实验。

5.2.2结果判读

4

结果分为5类，按照以下的情况进行判读。以产生50%凝集的(++)血清最终稀释倍数为被检血清的效价。1:40(++