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克氏原螯虾白斑综合征诊断和防控技术规程

1范围

本文件规定了由白斑综合征病毒(Whitespotsyndromevirus，WSSV)引起的克氏原螯虾(Procambarusclarkii)白斑综合征的临床症状、病原鉴定方法与结

果判定，并界定了克氏原螯虾白斑综合征的流行特征，同时给出了防控方法。

本标准适用于克氏原螯虾白斑综合征的诊断以及稻田和池塘养殖克氏原螯

虾白斑综合征的防控。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的

修改单）适用于本文件。

GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T28630.2-2012白斑综合征(WSD)诊断规程第2部分：套式PCR检

测法

SC/T7014-2006水生动物检疫实验技术规范

GB11607-1989渔业水质标准

NY5070-2002无公害食品水产品中渔药残留限量

NY5071-2002无公害食品渔用药物使用准则

SC/T1135.4-2020稻渔综合种养技术规范第4部分：稻虾（克氏原螯虾）

3术语与定义

克氏原螯虾白斑综合征

克氏原螯虾白斑综合征，是指由白斑综合征病毒感染引起的克氏原螯虾发病

或死亡的一种病毒性疾病。

4试剂和材料

4.1试剂

检验中所需试剂的配制按照GB/T28630和SC/T7014的规定执行，Taq

MasterMix、10×PCR缓冲液(无Mg2+)、DNA分子量标准参照物与核酸提取试

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剂盒选用专业试剂公司提供的商品化试剂，上述未提及的见附录A。

4.2水

应符合GB/T6682中一级水的规格、且用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理水(A

1)。

4.3引物

外侧引物：F1:5’-ACTACTAACTTCAGCCTATCTAG-3’;R1:5’-TAATGCGGGTGTAATGTTCTTACGA-3’。用来扩增WSSVDNA的1447bp产

物，-20℃保存。

内侧引物（套氏引物）：F2:5’-GTAACTGCCCCTTCCATCTCCA-3’;R2：5’-TACGGCAGCTGCTGCACCTTGT-3’。用来从第一步PCR扩增的1447bp产物中

再扩增出941bp的产物，-20℃保存。

内参引物：F3：5’-TGCCTTATCAGCTNTCGATTGTAG-3’；R3：5’-TTCAGNTTTGCAACCATACTTCCC-3’，扩增十足类动物DNA中848bp的片段

产物，20℃保存。

5设备和器械

主要设备与器械如下：解剖盘、剪刀、镊子、手术刀、酒精灯、电子天平、高压灭菌锅、恒温培养箱、超净工作台、普通冰箱、高速冷冻离心机、微量移液

器、PCR扩增仪、离心管和PCR管、水平电泳系统和凝胶成像系统等。

6流行情况及临床检查

6.1流行情况

一般在每年的4～7月水温达22℃~28℃时发生，主要危害成虾，幼虾也可

感染，是克氏原螯虾养殖中主要病害之一。

6.2临床症状

患病克氏原螯虾主要临床症状为体色变暗、摄食减少、反应迟钝、活力较差。

6.3剖检

患病克氏原螯虾内脏器官大体病变不典型，主要表现为部分肠段中空无食物，肠壁透明，肠管较细；头胸甲易剥离；剥开头胸甲后部分病虾可在与头胸甲与肌

肉之间的膜上见到大量白色斑点。其余器官如肝胰腺、鳃等无明显变化。

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7实验室样品采集

样品采集按GB/T28630.2-2012中附录B的规定执行。

8DNA提取

8.1样品准备

8.1.1活体或冰冻的仔虾及幼虾个体样品(去虾眼)约0.1g；活体或冰冻的

成虾鳃、心脏、肝胰腺、肠、步足、游泳足等组织样品约0.1g。

8.1.2将上述待检样品用生理盐水洗去血污，剪碎，放入灭菌后的1.5mL离心管中，后用匀浆器将样品均浆成糊状，避免各样品间的交叉污染。所有非一次性使用的样品处理工具要经清洗，然后浸于新配制的75%酒精中5min，无菌水

充分清洗两次后，方可使用。

8.2提取DNA

8.2.1加入500μL抽提缓冲液(A.2)，震荡混匀，37℃温育1h；

8.2.2加入10μL20mg/mL的蛋白酶K(A.3)，至终浓度