OsPLATZ2与OsGRFs互作调控水稻粒型.pdf

摘要

粒型是水稻产量构成的关键性状之一，揭示其分子调控机制具有重要意义。

PLATZ家族是一类植物特有的结合富含A/T序列的锌指转录因子，参与调控植物生

长发育和逆境响应，但目前绝大部分成员的功能和作用机制仍未知。本研究前期发现

成员OsPLATZ2正向调控水稻粒型，初步结果显示其编码蛋白能与控制粒型的生长调

节因子OsGRF4互作，但两者互作调控粒型的分子遗传机制仍不清楚。

本研究在确认OsPLATZ2的生物学功能基础上，从多方面验证OsPLATZ2与

OsGRF4的蛋白互作关系，分析OsPLATZ2的转录激活能力及其与OsGRF4互作对转

录激活活性的影响，并在遗传上探究OsPLATZ2与OsGRF4及其他水稻GRF成员在

粒型调控方面的关联性。本研究取得如下结果：

（1）OsPLATZ2功能敲除粒型和千粒重变小；超表达OsPLATZ2粒型和千粒重变

大，确认了OsPLATZ2正向调控粒型。

（2）通过Y2H、pull-down和BiFC实验证实了OsPLATZ2与OsGRF4存在蛋白

互作关系。并发现两者的互作需要OsGRF4包含QLQ和WRC结构域的完整C端。

（3）利用双荧光素酶瞬时表达系统证明OsPLATZ2和OsGRF4均具有转录激活

能力，且两者共存时具有更强的转录激活活性。OsPLATZ2和OsGRF4单基因敲除突

变体粒型均有明显下降，但OsGRF4单基因敲除体粒型下降程度较轻，而双基因突变

体与OsPLATZ2单基因敲除体粒型相似，上述结果证明，OsPLATZ2和OsGRF4在同

一通路上调控水稻粒型。

（4）OsPLATZ2与水稻GRF家族12个成员中的10个存在蛋白互作关系，其中

OsGRF8与OsPLATZ2的单基因、双基因敲除体的粒型表型模式与OsPLATZ2-OsGRF4

调控模块的相似，这说明OsPLATZ2-OsGRF8模块也是正向调控水稻粒型，两个模块

具有冗余功能。

综上，本研究发现转录激活因子OsPLATZ2通过与OsGRF4或其他GRF成员互

作，增强复合体的转录激活活性，调控其下游靶基因，进而影响水稻粒型。

关键词：水稻；粒型；转录因子；OsPLATZ2；OsGRF4

I

英文缩略语（符号表）

英文缩写英文全称中文全称

AdeAdenine腺嘌呤

AmpAmpicillin氨苄青霉素

Cas9CRISPR--associatedprotein9CRISPR相关蛋白9

cDNAComplementarydeoxyribonucleicacid互补DNA

ChlChloramphenicol氯霉素

Clusteredregularlyinterspacedshort成簇有规律的间隔短回文

CRISPR

palindromicrepeat重复序列

dDay天

ddHODoubledistilledwater双蒸水

2

DEPCDiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯

DMSODimethysulfoxide二甲基亚砜

dNTPsDeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸

EDTA