弓形虫GRA12蛋白对小鼠C3a及血脑屏障影响的研究.pdf

摘要

ToxoplasmagondiiT.gondii

弓形虫（，）是一种具有机会致病性的寄生原虫，能够

感染温血动物的有核细胞，导致怀孕宿主出现流产、早产和死胎等典型症状。由于弓

Toxoplasma

形虫病的感染具有嗜神经性，宿主容易继发产生瘫痪、弓形虫脑炎（

encephalitis,TEC3“

）以及弓形虫眼病等症状。实验室前期研究发现补体分子以双刃

”C3

剑的形式在感染弓形虫的小鼠体内发挥作用，即分子既能抑制弓形虫在宿主体内

TE

的增殖，又能促进弓形虫入侵宿主脑组织产生。本研究承前启后，用弓形虫蛋白

C3

代替弓形虫进行探究，旨在发现弓形虫蛋白对小鼠分泌以及血脑屏障

Blood-brain-barrier,BBBC3a

（）通透性变化的影响，筛选出和直接互作的弓形虫蛋

白，探究该蛋白能否对小鼠C3a的表达以及BBB通透性的破坏产生影响。

bEnd3Excretory/secretoryantigens,ESA

本研究通过在细胞中添加代谢分泌抗原（）

ToxoplasmaLysateantigen,TLAbEnd3

和可溶性抗原（），发现两种蛋白都能促进细

C3ESATLATLA

胞表达的提升，其中出现刺激作用的时间段较早，较晚。对注射

C3EvansBlue,EB

导致高表达的小鼠注射伊维斯蓝（），进行灌流实验，发现此时间

段内小鼠的BBB通透性提升。

利用pulldown实验筛选和C3a直接发生相互作用的弓形虫蛋白，得到107种特

异性蛋白。借助生物信息学分析特异性蛋白的性质和功能，发现和弓形虫粘附和入侵

功能相关的蛋白占比较大。综合分析所有特异性蛋白，选择GRA12蛋白作为弓形虫

的代表蛋白进行研究。

GRA12Escherichiacolibacterer,E.

构建插入目的基因的表达载体，借助大肠杆菌（

coli）对蛋白进行原核表达，利用杆状病毒对蛋白进行真核表达。使用重组GRA12蛋

bEnd3GRA12bEnd3C3Claudin5

白刺激细胞，发现蛋白能够促进细胞的表达上升，

GRA12C3EB

表达下降。小鼠免疫蛋白后表达出现峰值，在峰值期间注射