TAp63通过SIRT1_PGC-1α通路减轻MPTP_MPP 诱导的帕金森病模型的氧化应激反应.pdf

TAp63通过SIRT1/PGC-1α通路减轻MPTP/MPP+诱导的帕金森病

模型的氧化应激反应

摘要

帕金森病（Parkinson’sdisease,PD）的发病机制尚未完全明晰，且目前没有有效

PD

的预防和阻止疾病进展的治疗手段，为寻找有效的防治措施，深入探索的发生

机制至关重要。TAp63是p53蛋白家族成员之一，在调控细胞周期、凋亡及衰老等

1silentinformation

方面发挥关键作用。之前有研究指出，沉默信息调节因子相关酶（

regulator1,SIRT1）在线粒体生物合成、线粒体能量产生和氧化应激中起关键调节作

用。

目的：

本实验拟构建PD体内和体外模型，探究TAp63在PD中对氧化应激的影响及

其可能的作用机制。

方法：

本次研究中，我们通过转染高表达TAp63的慢病毒后给予1-甲基-4-苯基-吡啶

1-methyl-4-phenylpyridiniumMPP+SH-SY5Y6

离子（，）处理细胞，构建个细胞分

++

组（对照组，MPP组，TAp63NC组TAp63NC+MPP组，TAp63过表达组，TAp63

+MPP+TAp63tyrosinehydroxylaseTH

过表达组），观测其、酪氨酸羟化酶（，）、

SIRT1、PGC-1α的蛋白表达量变化，并进行丙二醛（MDA）含量、还原型谷胱甘肽

GSHROS

（）含量及活性氧（）含量检测；此外，我们利用脑立体定位技术，在小

鼠双侧黑质（Substantianigra，SN）注射高表达TAp63的重组腺相关病毒，联合1-

-4--1,2,3,6-1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP

甲基苯基四氢吡啶（）

腹腔注射，将36只雄性C57BL小鼠随机分为6组（对照组，MPTP组，TAp63NC

组，TAp63NC+MPTP组，TAp63过表达组，TAp63过表达+MPTP组），转棒实验、

爬杆实验检测各组小鼠神经运动功能，并利用免疫组织化学染色观察小鼠脑组织黑

THWesternplotting

质致密部阳性细胞数，实验检测相关蛋白表达量变化，并进行

MDA、GSH和ROS含量检测。

结果：

1.MPP+SH-SY5YMPP+TAp63TH

处理细胞后，与对照组相比，组、含量显著

++

下降；与TAp63NC+MPP组相比，TAp63过表达+MPP组细胞TAp63、TH含量显

著增加，提示MPP+对SH-SY5Y细胞造成损伤并下调TAp63蛋白表达，高表达TAp63

I

+

可部分拮抗MPP对多巴胺能神经元的损伤。

2.MPP+MDAROS