酶促反应动力学.ppt

又以KmI对[I]作图，据此图可求出Km和KI值.竞争性抑制的KI与I关系图抑制剂的解离常数由此可看出，KI愈小，表明抑制剂与酶的结合力愈强，对酶催化反应能力的抑制作用就越强。当酶的活性部位与一个抑制剂分子相结合时，KmI与[I]的关系为一直线，可称为线型竞争抑制；如果酶的活性部位与两个以上的抑制剂分子相结合，则与的关系为一抛物线，可称为抛物线型竞争抑制。对米氏方程的讨论：当[s]Km时，属一级反应。当[s]Km时，，属零级反应。当[s]＝Km时，。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。例4-1：有一均相酶催化反应，km值为2×10-3mol/l，当底物的初始浓度[S0]为1×10-5mol/l时，若反应进行1min，则有2%的底物转化为产物。试求：（1）当反应进行了3min，底物转化为产物的百分数是多少？此时底物和产物的浓度分别为多少？（2）当[S0]为1×10-6mol/l时，也反应了3min，底物和产物的浓度又是多少？（3）最大反应速率rmax值为多少？单击此处添加小标题mol/l单击此处添加小标题时单击此处添加小标题∴单击此处添加小标题解：（1）根据题意，﹤，此时一般可认为按一级反应处理，其动力学方程可表示为：将已知数据代入上式中，求得min-1、当t=3min时，可以求得mol/lxS=6%mol/l当[S0]为1×10-6mol/l时，仍可视为一级反应，∴t=3min时，同样可求得xS=6%mol/lmol/l据得mol/l·min米氏常数的意义动力学参数的意义是酶的一个特性常数：的大小只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。值随测定的底物浓度、反应的温度、pH及离子强度而改变。根据km值可以推断酶和底物的亲和力。如果酶的专一性不高，可催化几种底物发生反应时，km值最小的就表示酶与这一底物的亲和力最大，反之，则最小。根据km值，可以估计胞内基质浓度，如时，。那么只要稍微改变基质浓度，的变化就很大，即反应速率对基质浓度改变的敏感性很大，如果或时，基质浓度相差1000倍，但反应速率只增加一倍，即在生理上保持是没有意义的。若已知某个酶的Km值，就可以计算出在某一底物浓度时，其反应速率相当于Vmax的百分率。01Km值可以帮助推断某一代谢反应的方向和途径。催化可逆反应的酶，对正逆两向底物的Km不同。02Km可以帮助推断某一反应的方向和途径乳酸脱氢酶乳酸丙酮酸脱氢酶乙酰CoA丙酮酸脱羧酶乙醛Km=1.7x10-5mol/LKm=1.3x10-3mol/LKm=1.0x10-3mol/L丙酮酸Vmax和K3(Kcat)的意义在一定的酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数。当[s]很大时，Vmax=K3『E]。Vmax与K3成线性关系，而直线的斜率为K3。K3表示当酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫转换数（简称TN)，通称催化常数（catalyticconstant,kcat).Kcat值越大，表示酶的催化效率越高。酶动力学图解法要建立一个完整的动力学方程，必须通过动力学实验确定其动力学参数。对Michaelis-Menten方程，就是要确定rmax（或k+2）和km值。但直接应用Michaelis-Menten方程求取动力学参数所遇到的主要困难在于该方程为非线性方程。为此常将该方程加以线性化，通过作图法直接求取动力学参数。1.双倒数图解法（LineweaverBurk图解）双倒数1Km11???=??????+??VVmax[S]Vmax（一）图解法斜率=Km/Vmax1/Vmax1/Km双倒数法应用广泛，但有两个缺点：选用基质浓度不宜等量增加，否则在作图时，点都会集中在纵轴附近，难于正确作图。基质浓度以选用1.0、1.11、1.25、1.43、1.67、2.0、2.5、3.33，5和10等为宜，这样倒数值几乎是等量递增的。反应速率测定稍有误差，其倒数值误差必将