Tmem100-iPAs复合体靶向干预TRPV通道防治骨关节炎慢性疼痛的机制研究.pdf

Tmem100-iPAs复合体靶向干预TRPV通道防治骨关节炎慢性疼

痛的机制研究

摘要

骨关节炎（OA）是影响全球老年人口的一种常见的慢性疾病，它不仅导致患者

疼痛难忍，还会限制其行动能力，进而严重降低生活质量。全球范围内的统计数据

表明，65岁及以上人群中，有超过60%的老年人因骨关节炎遭受到不同程度的行动

能力限制。同时，骨关节炎还可能影响到那些工作中需要大量体力劳动的年轻人，

以及那些曾经遭受过关节损伤的患者。随着全球老龄化趋势日益严重，由于骨关节

炎引起的疼痛和其他相关问题，对个人的生活和社会的负担越来越重。了解骨关节

炎疼痛的发生机制是当前医学研究的关键点之一。通常情况下，急性疼痛起因与关

节内软骨损伤、软骨下骨等组织的异常损伤以及修复过程中产生的炎症反应。随着

病情的发展，患者可能会经历长期的慢性疼痛，伴随关节僵硬、畸形和活动能力下

降，并且常有严重的局部炎症现象。

全球许多地区的研究已经揭示了骨关节炎患者疼痛的多种特点，包括疼痛阈值

的下降、对机械性和热性刺激的过敏，以及反射性疼痛的存在。研究者通过对动物

模型的实验发现，初始的急性炎症性疼痛可能随疾病的持续演变成为神经源性疼痛，

并且在骨关节炎的后期，慢性神经源性疼痛成为主要的症状。当前，面对疼痛患者

的治疗选择相对有限，有效治疗手段不足，且伴随着较高的副作用和风险，特别是

在当阿片类药物危机的背景下，开发出更加有效并且安全的治疗方法显得尤为迫切。

因此，深入研究骨关节炎慢性神经源性疼痛的分子机理，并寻求新的分子靶点来提

升治疗效果，已经成为骨关节炎研究领域的一个热点。

瞬时感受器电位香草酸受体1（TRPV1）通道是神经纤维以及具有感知功能细

胞发挥感觉作用的关节分子之一，在人的骨关节炎和大鼠碘乙酸钠（MIA）骨关节

炎模型中，TRPV1的活动是疼痛产生传到，骨侵蚀和骨小梁裂解的重要基础，在骨

科神经病理性疼痛发生发展中发挥重要作用。Tmem100蛋白可以通过调节脊髓背根

神经节TRPV1和TRPA1的相互联系起到调控疼痛信号传导的作用。Tmem家族蛋

白是新近被认识到具有潜在调控持续神经病理性疼痛功能的蛋白。Tmem100是一个

具有134个氨基酸的双跨膜蛋白，主要位于小鼠背根神经节和三叉神经内CGRP阳

性多肽神经元内，在慢性炎性疼痛时表达明显增加。蛋白肽段之间的特异性作用只

会选择性阻断蛋白-蛋白之间的相互作用，而不会影响其他形式蛋白的产生，可以选

择性的针对某信号通路实现定向的“功能性敲除”。此外腺相关病毒（AAV）仍是当

下常用的有效可靠的重组病毒载体，并且AAV载体可以高效地转染主要感觉神经元

并且可以对神经性疼痛产生较长时间的控制作用。通过AAV作为载体，将针对

Tmem100的小分子干扰适体基因组合为Tmem100-iPAs复合体转染整合至隐神经神

经元基因组内，并得到稳定的表达产物，通过于组合基因后缀EGFP组成Tmem100-

iPAs-GFP组合体进行荧光标记，验证其在细胞内的正常表达。

本研究选取了Tmem100作为潜在的靶点，探讨了其在调控疼痛信号转导中的

关键作用，以及如何通过Tmem100-iPAs复合体对TRPV1通道进行靶向干预。利用

MIA建立了大鼠的骨关节炎模型并对照使用生理盐水处理，同时对隐神经注射含

Tmem100-iPAs的复合体，研究了注射5周后复合体对TRPV1表达、神经元健康状

态，以及TRPV1阻断率和相关因子的影响。通过免疫组化和免疫荧光实验，此外评

估了注射后可能引起的免疫反应、炎症反应、免疫细胞活性和神经损伤情况，并确

认了复合体在神经细胞内的稳定表达。此外，通过对大鼠隐神经神经元注射

Tmem100-iPAs复合体，并在5周后进行WesternBlot和PCR检测，我们观察到

TRPV1、TRPA1和Tmem100的表达与转录变化。研究结果表明，Tm