负载乳酸氧化酶的纳米反应器在黑色素瘤免疫治疗中的应用探索.pdf

摘要

近年来，纳米反应器可被用于肿瘤的化学动力学治疗、光动力学治疗以及

免疫治疗等领域并展示出良好的治疗效果。在乏氧肿瘤微环境中快速分裂的肿

瘤细胞会从氧化磷酸化代谢转变成糖酵解代谢途径，以满足肿瘤生长的高能量

和代谢需求，这种现象被称为“Warburg”效应。糖酵解产生的乳酸被认为是肿

瘤微环境（Tumormicro-environment，TME）中的代谢废物，它不仅为乏氧肿

瘤提供能量，还是肿瘤产生耐药性以及高侵袭性的主要原因。近期研究表明乳

酸在肿瘤微环境中的堆积还会抑制肿瘤免疫治疗的效果。

在本课题中设计一种包裹乳酸氧化酶（Lactateoxidase,LOX）的酸响应聚

合前药纳米反应器。该聚合前药纳米反应器由两种聚合物单体组成，一种为对

酸性环境响应的2-(Hexamethyleneimino)ethanol(CA7)单体，一种是对HO响

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应的喜树碱（Camptothecin，CPT）单体。两种单体组成的嵌段共聚物会自组装

形成装载LOX的纳米反应器，该聚合前药纳米反应器通过实体瘤的高通透性

和滞留效应（Enhancedpermeabilityandretentioneffect，EPR）靶向到肿瘤之

后，会对肿瘤的酸性环境做出响应，导致纳米粒子膜的渗透性发生改变，从而

使得肿瘤微环境中的乳酸可以穿透纳米粒子膜与包载的LOX接触。LOX会催

化乳酸氧化降解成CO和HO，从而改善肿瘤的免疫抑制微环境，增强肿瘤

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免疫治疗效果。另一方面，乳酸降解产生的HO可以诱导聚合前药纳米反应

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器中的CPT释放并杀死肿瘤细胞，进而引发肿瘤的免疫原性细胞死亡

（Immunogeniccelldeath，ICD），提高肿瘤免疫原性和免疫治疗的治疗效率。

通过酯化反应分别合成了酸响应单体CA7和HO响应的CPT单体

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CPTMA,通过核磁结果分析纯度分别约为92%和97%。再将两种单体通过可逆

加成断裂链转移（RAFT）聚合成两亲性嵌段共聚物PEG-PCPT-PCA7，最后两

亲性嵌段共聚物会自组装形成包裹LOX的纳米粒子。通过透射电子显微镜

(Transmissionelectronmicroscope,TEM）观察到组装成功的囊泡状的纳米粒子；

通过体外研究发现纳米粒子可以成功降解乳酸，产生HO，并诱导纳米反应

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器释放CPT。因为黑色素瘤中的乳酸浓度较高，所以在细胞实验中，本研究采

用了小鼠黑色素瘤细胞作为实验材料。研究结果显示纳米粒子可以降低B16细

胞培养基中的乳酸浓度；MTT的结果显示该纳米粒子能够通过释放CPT有效

抑制B16细胞增殖；通过检测B16细胞中的ATP含量、HMGB1蛋白表达量

和CRT蛋白表达量确认纳米粒子能够引发B16细胞的ICD从而具备激活免疫

治疗的潜力。

关键词：纳米反应器；乳酸；免疫抑制微环境；肿瘤免疫原性细胞死亡

Abstract

Inrecentyears,nanoreactorshavereceivedgrowinginterestintumordetection,

treatmentandprognosis.Nanoreactorsareoftencombinedwithchemodynamictherapy,

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