南美白对虾中两种双结构域甘露糖受体介导的免疫机制研究.pdf

摘要

南美白对虾(whiteshrimpPenaeusvannamei)因其较高的商业价值和优良的养殖性能，

在市场上备受青睐，但是由于其养殖规模的扩大，水源的不断恶化，导致虾类疾病大

规模爆发，对虾养殖业受到了严重威胁，发展受到了阻碍。南美白对虾具有经济动物

的优点，作为甲壳类动物，其主要是依赖先天免疫系统来抵御外界微生物的侵害。本

研究以南美白对虾为实验材料，研究了C型凝集素——甘露糖受体(Mannosereceptor,

MR)在先天免疫中的作用，MR是一种模式识别受体，在先天免疫反应中起重要作用，

这为甲壳类动物先天免疫系统的研究提供重要价值。在哺乳动物和硬骨鱼中已经广泛

报道了MRs的功能，而在甲壳类动物中鲜有报道。本研究从南美白对虾中克隆了两种

新的具有双结构域的甘露糖受体(命名为PvMR1和PvMR2)。

PvMR1基因cDNA全序列长1044bp，编码了347个氨基酸，通过SAMAT预测，

PvMR1蛋白包含一个信号肽（第1个氨基酸到第20个氨基酸）、两个CTLD结构域（第

52个氨基酸到第185个氨基酸和第211个氨基酸到第344个氨基酸）。有两个非常保守

的氨基酸基序：QPD(Gln-Pro-Asp，负责结合半乳糖)和EPN(Glu-Pro-Asn，负责结合甘

露糖)。在正常的对虾中，PvMR1基因转录主要分布在肝胰腺和肠道中，而其蛋白在血

淋巴、心脏、胃和肠中发现，但在转录表达最高的肝胰腺中未发现，这表明PvMR1在

肝胰腺中合成后会以蛋白形式分泌到其他组织中。PvMR1的显著上调在用鳗弧菌攻击

的对虾中得到证实。在用特异性抗体封闭后，PvMR1表达被抑制，伴随着对虾死亡率

的增加。细菌凝集实验和结合实验说明，重组PvMR1以Ca2+增强的方式对多种细菌菌

株具有凝集活性，并且还可以直接与微生物菌株结合。此外，通过细菌抑制和清除实

验，得出PvMR1蛋白不仅对细菌有凝集结合作用，同时还显示出了其抑制细菌的活性

以及对体内细菌的清除作用。更重要的是，我们通过特异性抗体封闭实验，证明了

PvMR1能够保护对虾免受细菌的感染。这些结果表明，PvMR1可能作为PRR对多种病

原体具有广泛的特异性识别，并通过凝集、结合和抗菌活性参与对虾的免疫应答。

从对虾中鉴定出的PvMR2来源于基因扩张，序列特征分析发现PvMR2在其碳水化

合物识别结构域中含有新的基序：QPT(Gln-Pro-Thr)和WHD(Trp-His-Asp)。这是由于

基因复制导致基因家族的扩展，而这些新基序的出现则有助于生物体适应压力或环境，

并且应对各种病原体感染。甲壳动物中的C型凝集素经历基因扩张并参与各种免疫反

应。但是，由基因复制产生的不同CTL的功能还没有完全确定。PvMR2基因的cDNA

全序列长988bp，编码了328个氨基酸。保守域分析表明，PvMR2蛋白包含一个信号肽

（第1个氨基酸到第23个氨基酸）、两个CTLD结构域（第40个氨基酸到第173个氨

基酸和第189个氨基酸到第327个氨基酸）。PvMR2主要在南美白对虾胃肠中表达，在

鳗弧菌攻击后，胃肠中PvMR2的mRNA水平在12h显著增强。通过细菌结合实验和微

生物多糖结合实验，得出重组PvMR2能广泛结合细菌，并且对微生物表面的多糖也展

现出结合能力。此外，凝集实验表明，PvMR2在Ca2+的作用下，可增强细菌的凝集。

细菌抑制和清除实验表明，PvMR2可以有效的抑制细菌的生长，更可以在体内对鳗弧

菌进行清除以此来保护生物体免受细菌侵害。特异性抗体封闭实验说明PvMR2蛋白在

保护对虾中起到作用，结果证实PvMR2蛋白可以通过降低对虾的死亡率来保护其免受

其细菌的伤害。这些结果表明PvMR2是可诱导的，并可能参与虾的免疫反应，以识别

潜在的细菌病原体。

综上所述，我们推测PvMR1和PvMR2蛋白质通过其凝菌抗菌以及清除细菌参与了

南美白对虾的抗菌免疫。这些结果表明PvMR1和PvMR2不仅可以作为免疫识别中的

PRR，还可以作为虾类先天免疫应答中的潜在抗菌蛋白。

关键词：南美白对虾，甘露糖受体，先天免疫，凝集，抑菌活性，细菌清除

ABSTRA