《丝状支原体丝状亚种和牛支原体鉴别诊断二重TaqMan实时荧光PCR法》.docx

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT11.220?????

CCS

FORMTEXTGXAS

FORMTEXTB41

FORMTEXT团体标准

团体标准

T/FORMTEXTGXASFORMTEXTxxxx—FORMTEXT202x

FORMTEXT?????

FORMTEXT丝状支原体丝状亚种和牛支原体鉴别诊断二重TaqMan实时荧光PCR法

DuplexTaqManreal-timePCRassayfordifferentialdetectionof

Mycoplasmamycoidessubsp.MycoidesSCandMycoplasmabovis

FORMDROPDOWN

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FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西标准化协会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/GXASxxxx—202x

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丝状支原体丝状亚种和牛支原体鉴别诊断二重TaqMan实时荧光PCR法

范围

本文件规定了应用二重TaqMan实时荧光PCR技术对丝状支原体丝状亚种和牛支原体进行鉴别检测的材料准备、操作方法及结果判定。

本文件适用于丝状支原体丝状亚种和牛支原体的快速鉴别检测，可对临床样品及分离培养物进行检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T18649牛传染性胸膜肺炎诊断技术

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

丝状支原体丝状亚种mycoplasmamycoidessubsp.mycoides，Mmm

Mmm是柔膜体纲支原体目支原体科支原体属的成员，是牛传染性胸膜肺炎（contagiousbovinepleuropneumonia，CBPP）的病原体。CBPP又称牛肺疫，是一种对牛属动物危害严重的高度接触性传染病，以高热、呼吸困难、咳嗽、肺小叶间淋巴管浆液-渗出性纤维素性炎和浆液纤维素性胸膜炎为特征。

牛支原体mycoplasmabovis，Mbovis

Mbovis是柔膜体纲支原体目支原体科支原体属的成员，其感染牛属动物可引起一种危害较为严重的高度接触性传染病，以肺炎、乳腺炎、关节炎、生殖道炎、角膜结膜炎等为特征。

TaqMan实时荧光PCR

是指在PCR反应体系中加入基于TaqDNA聚合酶5’核酸酶活性的荧光标记探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。

二重TaqMan实时荧光PCR

在同一TaqMan实时荧光PCR反应体系中加入两对引物和两条荧光探针，以实现同时扩增并检测两条目的基因的目的。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BHQ1：黑洞荧光猝灭基团1（blackholequencher1）

BHQ3：黑洞荧光猝灭基团3（blackholequencher3）

Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数（cyclethreshold）

CY5：花氰染料CY5（cyanine5）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

FAM：6-羧基荧光素（6-carboxyfluorescein）

Mbovis：牛支原体（mycoplasmabovis，Mbovis）

Mmm：丝状支原体丝状亚种（mycoplasmamycoidessubsp.mycoides，Mmm）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

检测材料

用于Mmm和MS鉴别检测的特异性引物

Mmm上游引物MmmSC-F：5’-ATCCCATATTTTAGAATAAGAGT-3’

Mmm下游引物MmmSC-R：5’-CAAAATATGAACTAACAAAGATG-3’

Mmm荧光探针MmmSC-P：5’-CY5-ACTAGATATGGGGTTTTCGTAATTTCT-BHQ3-3′

Mbovis上游引物M.Bovis-F：5’-ATCGCTATGGAATATTAATCA-3’

Mbovis下游引物M.Bovis-R：5’-GTT