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AgNWs-PAM-Ce6对烟曲霉菌性角膜炎治疗作用的研究

摘要

目的：探究银纳米线（silvernanowires,AgNWs）和光敏剂二氢卟吩e6（Chlorine6,

Ce6Aspergillusfumigatus,A.fumigatus

）联合使用对烟曲霉菌（）性角膜炎的治疗作

用。

1.Ce6Polyacrylamide,PAM

方法：将的羧基与高分子聚合物聚丙烯酰胺（）支链上

的氨基连接形成共价键，将得到的PAM-Ce6对AgNWs进行包载，最终制备得到

AgNWs-PAM-Ce6TransmissionElectronMicroscope,

纳米材料。采用透射电子显微镜（

TEM）对AgNWs-PAM-Ce6进行表征检测。通过1,3-二苯基异苯并呋喃

1,3-Diphenylisobenzofuran,DPBFAgNWs-PAM-Ce6

（）荧光染色实验检测产生活性

氧（reactiveoxygenspecies,ROS）的能力。2.通过最小抑菌浓度（minimalinhibit

concentration,MIC）实验确定AgNWs-PAM-Ce6能够抑制烟曲霉菌菌丝生长的最低

浓度，通过比较浓度为MIC的AgNWs-PAM-Ce6和AgNWs对烟曲霉菌孢子、菌

90

AgNWs-PAM-Ce63.

丝和生物膜生长的抑制作用进一步验证的抑菌能力。通过扫描

电子显微镜（ScanningElectronMicroscope，SEM）、碘化丙啶（propidiumiodine,PI）

染色实验和黏附实验验证AgNWs-PAM-Ce6对烟曲霉菌菌丝形态、菌丝细胞膜和分

生孢子黏附能力的影响，进一步探究AgNWs-PAM-Ce6抑制烟曲霉菌的作用机制。

4.通过CCK-8实验和小鼠角膜Draize试验检测AgNWs-PAM-Ce6对永生化人角膜上

皮细胞（HumanCornealEpithelialCells,HCECs）和小鼠RAW264.7细胞的细胞毒性

5.C57BL/6

以及小鼠眼表毒性。建立烟曲霉菌感染的小鼠角膜炎动物模型，给予

AgNWs-PAM-Ce6每日4次局部点眼治疗。在治疗第3天和5天，通过裂隙灯对感

染后小鼠角膜进行拍照和临床评分，评估其对小鼠真菌性角膜炎的治疗效果；进一

步通过菌落计数实验和苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色实验观察小鼠角

6.

膜中真菌负荷和中性粒细胞的浸润；细胞实验和动物实验均根据处理方式设置为

四组：空白对照组、AgNWs-PAM-Ce6处理组、单纯烟曲霉菌感染组以及经烟曲霉

AgNWs-PAM-Ce6HCECsRAW264.7

菌感染后的处理组。将经烟曲霉菌感染的、

细胞以及小鼠角膜分别用PBS和AgNWs-PAM-Ce6进行处理。使用PCR技术检测

IL-1βIL-6TNF-αmRNAELISA

细胞中炎症因子、