病毒转基因技术原理腺相关病毒.pptVIP

野生型AAV-2在Rep的作用下，定点整合于人19号染色体的AAVSl位点。可以通过高MOI感染以及对细胞敏感的血清型的衣壳包装，可能增加AAV的单链DNA入核并与细胞染色体发生重组的几率。基因打靶型AAV载体依赖于DNA的双链断裂(doublestrandbreak，DSB)，AAV可通过同源重组修复DNA双链可介导包括插入、缺失、点突变等多种遗传修饰的细胞内的基因打靶。重组AAV不含rep基因，定点整合的可能性极度下降。因此，基因打靶型AAV载体重点在于设计，载体序列与染色体靶基因序列的同源臂的匹配长度，将载体上待突变的基因放在中央。3~5%的感染细胞可以发生整合，显著高于转染或电穿孔方式获得的基因打靶频率，且在打靶中AAV介导的基因表达可以长期持续、并具有高度的保真性。第二部分基因打靶型腺相关病毒载体rAAV载体应用于基因校正、基因阻断治疗疾病或生产转基因家畜、用于农业和研究的大型动物等具有无可比拟的优势，如：介导的基因打靶的效率高达1％、高于质粒载体转染或电转化，宿主范围广泛，可利用的多种亚型等。主要缺陷是大约10％仍是随机整合、具有潜在的致死或致癌效应。研究显示可采用成体干细胞并在体外筛选特异打靶克隆用于疾病治疗。第二部分基因打靶型腺相关病毒载体0102策略3细胞内整合表达优势:具有快速、规模化、可重复性以及适用于不同血清型病毒纯化的