荧光光度分析法测定维生素B2-全.pptVIP

荧光分析仪光源样本池第一（激发）单色器第二（发射）单色器检验器显示、记录装置将已知量的标准物经过与试样相同的处理后，配成一定浓度的标准溶液，并测定他们的荧光强度，绘制一条以荧光强度和标准溶液浓度的标准曲线，然后测定未知样的浓度。标准曲线法七、荧光测定方法荧光猝灭法01在一般荧光分析中，荧光的猝灭现象是不02可避免的，但是我们可以利用猝灭现象，进行03荧光分析。例如一物质本身不会发光，也不会04与其它物质形成荧光物质，但它会使另外一种05会发射荧光的物质荧光强度降低，荧光强度的06下降程度与该物质的浓度成比例，此法成为荧07光猝灭法。08特点灵敏度高：测定下限0.1～0.001μg·mL-1,比分光光度法高2～4个数量级.仪器设备相对简单、体积小操作较简便反应时间也较快荧光分析法的特点及应用2.荧光光度法的应用生物化学分析、生理医学研究、临床检测（1)直接测定能产生荧光的物质带苯环的氨基酸：色氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸(2)测定能与荧光试剂反应生成荧光化合物的物质荧光生色团标记蛋白质，研究蛋白质的结构；致癌物同核酸结合常引起显著的荧光(3)荧光熄灭法测定猝灭剂一、实验目的：学习和掌握荧光光度分析法的基本原理和方法学会使用荧光分光度计实验一荧光法测定医用维生素B2中核黄素的含量二、实验原理核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。核黄素在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测核黄素时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。01化学名：7,8-二甲基－10［(2S,3S,4R)-05分子量：376.360310H）-二酮022,3,4,5-四羟基戊基］苯并蝶啶-2,4（3H，04分子式：C17H20N4O6实验仪器RF-5301PC荧光光度计日本岛津公司仪器介绍拥有世界最高水平的S/N，可达到150以上。最适合高灵敏度、高分辨率测定。其主要参数和特点测定范围：220~900nm带宽：1.5、3、5、10、20nm灵敏度：S/N150测定方式：定性分析、同步光谱分析、定量分析、时间过程测定。荧光分析法简述指导教师：赵成国什么是荧光呢？当某些物质被光照射后，01它会吸收一定频率的光，而发射出波长更长的02光，当光停止时，发射光也随即消失，这就是03荧光现象，它发出的光就叫荧光。第一次发现04荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物05学家莫纳德斯（N.Monardes）,在一种木头06切片的水溶液中，看到了极为可爱的天蓝色，07以此开始了荧光研究。08、概述直到1852年在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍长些，才判明这种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不是由光的漫射作用所引起的，才确立了荧光是光发射的概念。到19世纪末人们已经知道了包括荧光素、曙红、多环芳烃等600种以上的荧光物质。20世纪以来，荧光现象被研究得更多了，发现了共振荧光、增感荧光，能够进行荧光产率得绝对测定，还进行了荧光寿命的直接测定等等。二、荧光发生机理当一些物质被光照射后，物质的分子吸收光以后，便以基态跃迁到激发态，成为激发分子，然后通过相互碰撞或和其它溶剂分子碰撞等去活化的过程而消耗了能量，回到第一激发态的最低振动能级，这种跃迁称为无辐射跃迁，它不会发光。当电子由激发态的最低振动能级跃迁回基态的不同振动能级时，则以荧光的形态发出能量。激发通常在室温下物质分子大部分处于基态的最低振动能级（?=0）。当电子吸收一定频率的电磁辐射发生能级跃迁时，可上升至不同激发态的各振动能级，其中大部分分子上升至第一激发单重态（S1），这一过程称为激发。处于激发态的分子是不稳定，它可以通过01不同的途径回到基态，这一过程称为去活化。02去活化过程有以下几种：03振动驰豫溶液中分子间碰撞机会很04多，通过碰撞溶质分子将过剩的能量转移给溶05剂分子，通过非辐射跃迁而降至同一能态的最06低振动能级，这一过程称为振动驰豫。07去活化过程内部转换同一多重态的不同电子能级间可能发生内部转换。S2S1或T2T101条件：当S2较低振动能级与S1较高振动能级的能量相当，且发生重叠时分子才有可能S2