食品饮料中维生素的测定.ppt

紫外吸收光谱：分子价电子能级跃迁。波长范围：100-800nm.(1)远紫外光区:100-200nm(2)近紫外光区:200-400nm(3)可见光区:400-800nm250300350400nm1234eλ可用于结构鉴定和定量分析。电子跃迁的同时，伴随着振动转动能级的跃迁;带状光谱。2测定方法

2.2紫外分光光度法

紫外吸收光谱的产生

第28页，共69页，星期日，2025年，2月5日Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系假设一束平行单色光通过一个吸光物体第29页，共69页，星期日，2025年，2月5日

紫外分光光度法测定维生素A

E是吸收系数原理：VA为脂溶性的，测定VA时必须先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化，萃取不皂化部分，在经柱层析除去杂质等干扰物质，在紫外328nm下测定，求出含量。第30页，共69页，星期日，2025年，2月5日方法1）提取及皂化:称样10.00g→于烧杯中→加40ml水搅匀→移250ml分液漏斗中→加氨水5ml→加乙醇35ml→摇匀→用乙醚抽提（每次40ml抽提三次）→收集乙醚层→用10ml水洗乙醚层三次→水层再用30ml乙醚抽提一次→合并所用乙醚→用索氏法除乙醚→待瓶中乙醚除尽后→加30ml80%的KOH→40mlC2H5OH→加0.8g焦性没食子酸→83℃水浴30分钟（皂化脂肪）→冷却后移入250ml分液漏斗中→加60ml水→用40ml乙醚抽提三次→合并乙醚抽提液→用水洗至中性→用索氏法除乙醚→除去后用5ml石油醚溶解瓶中内容物→然后移入刻度试管中第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日2）层析在层析柱内装8cm高度中性氧化铝→2cm高度碱性氧化铝及1cm无水硫酸钠→以石油醚浸透→装皂化后的样液慢慢于柱内→用1～2ml石油醚洗试管→洗液倒入柱内，活塞打开以每分钟为35滴左右的速度打开，当液面降到接近硫酸钠时→加5ml石油醚→随后用5ml洗脱液逐次洗涤。层析柱上第一个黄色层析层，一般是β-胡萝卜素，此带在12%洗脱液前后洗去，收集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黄色为止，此层可测β-胡萝卜素用，而VA一般在50%洗脱液洗出，用2ml刻度吸管收集1ml。吸约0.2ml于小试管中→加0.3ml25%三氯化锑→溶液如呈兰色→表明有VA存在，故0.5ml用石油醚定容10ml。b.方法第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日二、维生素D1.维生素D的性质维生素D是类固醇的衍生物，具有维生素D活性的物质约10余种，在功能上可以防治佝偻病。其中最主要的是维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙醇)。是由维生素D原经紫外线照射形成的。维生素D在鱼肝油和鸡蛋黄等食品中含量较多，一般成人不会缺VD，而婴儿容易缺乏。维生素D2药片吃多了中毒。第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日2.测定方法2.1三氯化锑光度法原理：在三氯甲烷溶液中，维生素D与三氯化锑结合生成一种橙黄色化合物，并于500nm波长处有一个最大吸收，其呈色程度与维生素D含量成正比。????维生素D／CHCl3＋SbCl3／CHCl3→形成橙黄色物质→500nm下测定?第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日说明食品中维生素D含量一般较低，而其他维生素及物质含量大于维生素D，对测定产生干扰，测定前必须经柱层析除去这些物质。此法测定值为D2和D3的总量。第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日2.2紫外分光光度法????VD／乙醇→265nm下测定第36页，共69页，星期日，2025年，2月5日2.3高效液相色谱法（HPLC）基本原理：试样在焦性没食子酸的保护下皂化，用石油醚萃取不皂化物，萃取物经正相色谱柱分离富集，再用反相色谱柱进一步分离，紫外检测器测定，与标准试样比较定量。第37页，共69页，星期日，2025年，2月5日三、β-胡萝卜素的测定P198（GB/T5009.83—2003）第一方法是HPLC；第二方法为纸层析法。