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内质网应激状态下CXCL8促进食管鳞癌恶性进展的分子机制研究

摘要

内质网应激（endoplasmicreticulumstress，ERS）是一种由内质网

（endoplasmicreticulum，ER）功能障碍和异常蛋白积累引起的细胞应激

状态，它触发了一种适应性程序反应，称为未折叠蛋白反应（unfolded

proteinresponse，UPR）。已有研究表明，内质网应激参与了多种恶性肿

瘤的发生发展，但其在食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscell

carcinoma，ESCC）中的作用尚未明确。本课题通过转录组测序（RNA

sequencing，RNA-seq）筛选出CXCL8为ESCC细胞发生内质网应激后差

异表达显著基因之一，后续研究主要探讨了CXCL8在食管鳞癌细胞处于

内质网应激状态下的上调机制，并进一步研究了其在食管鳞癌发生发展

过程中发挥的生物学作用及可能的潜在下游分子机制。

第一部分内质网应激状态下的食管鳞癌细胞中CXCL8高表达的机制

究

目的：研究CXCL8在食管癌组织及食管鳞癌细胞系中的表达情况，并

探讨其在内质网应激状态下的食管鳞癌细胞中高表达的分子机制。

方法：

1.应用qRT-PCR及western-blot方法检测100nM毒胡萝卜素

（Thapsigargin，TG）处理不同时间后的KYSE-150和TE-1细胞中内质网

应激标志物的表达情况。

2.通过建立体外食管鳞状细胞癌内质网应激模型并进行RNA-seq分

析，筛选差异表达基因。

3.应用qRT-PCR及western-blot方法检测100nMTG处理不同时间后

的食管鳞癌细胞系中CXCL8的表达情况。

4.通过GEPIA（基于TCGA、GTEx数据库）数据库分析CXCL8在多

种肿瘤中的表达及在食管癌组织和相应正常组织中的表达情况。

5.应用qRT-PCR及western-blot方法检测CXCL8及其受体CXCR1和

CXCR2在正常食管上皮细胞、食管鳞癌细胞系（KYSE-150、KYSE-170、

TE-1）中的表达情况。

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6.应用qRT-PCR及western-blot方法检测敲低内质网应激三种跨膜传

感器及过表达转录因子XBP1和ATF4后CXCL8的表达情况。

7.采用双荧光素酶报告基因实验检测ATF4和XBP1对CXCL8的转录

调控作用。

结果：

1.qRT-PCR结果显示，TG处理后的食管鳞癌细胞系中内质网应激

标志物XBP1、ATF4和ATF6表达显著升高，并且峰值位于TG（100nM）

处理ESCC细胞12小时左右。

2.RNA-seq数据分析提示CXCL8是测序结果中差异表达比较明显的

基因之一，经验证其在食管鳞癌细胞中表达显著升高，并在TG（100nM）

处理12小时时表达位于峰值。GEPIA数据库提示CXCL8在食管癌组织中

的表达较正常组织显著升高（P＜0.05）。qRT-PCR结果显示，CXCL8及

其受体CXCR1和CXCR2在三种食管鳞癌细胞系中的表达均呈现不同程度

的升高（P＜0.05）。

3.CXCL8在敲低IRE1α和PERK后的食管鳞癌细胞中的mRNA和蛋白

表达水平均显著下降（P＜0.05），而敲低ATF6对其表达并无明显影响。

CXCL8在过表达XBP1及ATF4后的食管鳞癌细胞中的mRNA和蛋白表达

水平均显著升高（P＜0.05）。

4.经检索JASPAR与PROMO数据库，发现CXCL8启动子区（-

181bp/-175bp）与（-40bp/-28bp）位置有XBP1和ATF4的结合位点，进一

步的双荧光素酶报告基因实验检测证实XBP1和ATF4可调控CXCL