2.2动物细胞工程（第2课时）课件 高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第2章细胞工程第2节动物细胞工程动物细胞融合技术与单克隆抗体（第二课时）

从社会中来

特异性抗体是由特定的浆细胞产生，能否通过动物细胞培养让其源源不断地产生特异性抗体呢？诱导动物细胞融合。有没有一种方法能获得兼具两者功能的细胞？针对新冠肺炎真正的特效药是什么？单克隆抗体浆细胞在体外无法一直增殖，但癌细胞却能无限增殖。

动物细胞融合实例实例1：自然条件受精作用1970年人工条件下的人-鼠细胞融合实验实例3：人工诱导实例2：多核细胞患肺结核病人的病理组织中观察到多核细胞

过程：AB一.动物细胞融合技术灭活的病毒、PEG、电融合等（2）诱导手段？（3）融合细胞类型？（4）AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质（1）融合原理？（5）融合成功的标志？细胞核的融合细胞膜的流动性（6）意义：突破了的局限，使成为可能。有性杂交远缘杂交

过程：（7）应用：(1)细胞融合技术已经成为研究________、_________、______和______________等的重要手段。(2)利用动物细胞融合技术发展起来的_________，为________________开辟了新途径。细胞遗传细胞免疫肿瘤培育生物新品种杂交瘤技术制造单克隆抗体AB一.动物细胞融合技术

一.动物细胞融合技术用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构（无核酸）。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合1.“灭活病毒”中灭活的具体含义是什么？2.灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？细胞核的融合融合实质及完成的标志：灭活病毒诱导法

向动物体内反复注射某种抗原使动物产生抗体从动物血清中分离所需抗体有什么方法解决这个问题？一.动物细胞融合技术传统抗体制备方法及缺陷提示：每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体抗体不纯缺点：产量低、纯度低、特异性差

有什么方法解决传统抗体制备存在产量低、纯度低、特异性差的问题？1个B淋巴细胞B淋巴细胞群大量单一抗体克隆产生在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的！米尔斯坦【英国】科勒【德国】解决1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒设计了一个极富创造性的试验方案：抗体B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞(单克隆抗体)一.动物细胞融合技术

从脾中提取①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因？获得能产生特定抗体的B淋巴细胞培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导融合将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合不能产生抗体，但能大量增殖二.单克隆抗体技术1.单克隆抗体制备的过程：多种B淋巴细胞能产生抗体，但不能大量增殖

原理:②诱导融合后的细胞有几种类型，若仅考虑两两细胞融合呢？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？2杂交瘤细胞(多种)13置于选择性培养基上培养第一次筛选融合的细胞BBB132B-瘤瘤-瘤瘤√选择培养基只允许杂交瘤细胞生长、增殖，未融合的亲本细胞和融合了同种核的细胞不能生存.二.单克隆抗体技术

多种杂交细胞思考：若只考虑细胞的两两融合，融合形成的细胞有几种？需要的是？BB瘤-瘤132B-瘤杂交瘤细胞(既能迅速大量增殖，又能产生抗体)第一次筛选

（2）用特定的选择培养基（HAT培养基）进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。

④是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需的抗体？杂交瘤细胞(多种)每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞克隆化培养抗体检测第二次筛选抗原-抗体杂交技术原理：抗原和抗体能够特异性结合原理：细胞增殖阳性细胞（分泌的抗体能与特定抗原结合）经多次筛选，可获得足够数量能分泌所需抗体的杂交瘤细胞二.单克隆抗体技术

在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法阳性孔一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养(克隆化培养)二.单克隆抗体技术

项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种融合细胞，还有未融合的细胞等筛选目的筛选方法单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞二.单克隆抗体技术用特定的选择培养基筛选：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。筛选出杂交瘤细胞筛选出能分泌所需抗