幽门螺杆菌23S rRNA_gyrA基因突变检测试剂盒（荧光PCR熔解曲线法）（CSZ2400025）.docx

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受理号：CSZ2400025

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：幽门螺杆菌23SrRNA/gyrA基因突变检测试剂盒

（荧光PCR熔解曲线法）

产品管理类别：第三类

申请人名称：江苏健为诊断科技有限公司

国家药品监督管理局

医疗器械技术审评中心

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目录

基本信息 3

一、申请人名称 3

二、申请人住所 3

三、生产地址 3

技术审评概述 4

一、产品概述 4

二、临床前研究概述 5

三、临床评价概述 9

四、产品受益风险判定 11

综合评价意见 13

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基本信息

一、申请人名称

江苏健为诊断科技有限公司

二、申请人住所

泰州市药城大道五期厂房G131号楼2-3层

三、生产地址

泰州市药城大道五期厂房G131号楼3层

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技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

试剂盒包含DNA聚合酶（MC）、Hp-PCR预混液（MC）、Hp-野生型对照（MC）、Hp-阴性对照（MC）。（具体内容详见产品说明书）

（二）产品预期用途

本产品用于定性检测幽门螺杆菌阳性患者正常粪便样本中幽门螺杆菌23SrRNA基因A2142G、A2142C、A2143G突变和gyrA基因A260T、C261A、T261G、G271A、G271T、A272G突变。结果只对样本是否存在突变进行判断，不具体区分突变位点。

本产品通过检测幽门螺杆菌23SrRNA基因2142、2143位点和gyrA基因87、91号密码子的突变，为临床医生评估个体中幽门螺杆菌的耐药特性提供参考。具体检测的突变位点与耐药类型的关系详见表1。

表1可检测的幽门螺杆菌23SrRNA和gyrA基因突变类型

基因名称

突变位点

碱基变化

耐药类型

23SrRNA

2142

A2142G

克拉霉素耐药

2142

A2142C

2143

A2143G

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gyrA

N87I

A260T

左氧氟沙星耐药

N87K

C261A

T261G

D91N

G271A

D91Y

G271T

D91G

A272G

（三）产品包装规格

48测试/盒

（四）产品检验原理

本产品采用荧光PCR熔解曲线法，其基本原理为：1）根据耐药基因突变位置上下游序列设计PCR扩增引物，并根据耐药基因突变设计荧光探针；2）通过不对称PCR扩增，生成与荧光探针杂交的单链寡核苷酸序列；3）PCR扩增完成后，在熔解曲线分析过程中实时检测反应体系荧光信号强度的变化，从而绘制反应体系的熔解曲线，并可确定该熔解曲线的熔点（Tm值），由此推断该序列的突变信息。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择

试剂盒主要原材料包括：引物、探针、TaqDNA聚合酶、dNTPs、幽门螺杆菌DNA、293T细胞基因组DNA等。

主要原材料均为外购方式获得。引物、探针为申请人自行设计后

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由专业的合成公司合成。申请人对主要原材料进行了供应商的选择，通过功能性试验，筛选出合格供应商，制定了主要原材料的质量标准并经检验合格。

2.企业参考品和质控品的设置情况

企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、最低检测限参考品、精密度参考品。阳性参考品9份，由突变型幽门螺杆菌菌株、阴性粪便样本组成，涵盖该产品可检出的所有突变型；阴性参考品11份，由特异性评价用菌株/人基因组DNA和野生型幽门螺杆菌的粪便样本组成，涵盖常见的种属相近的或引起症状相似的病原体，及人基因组DNA；最低检测限参考品18份，为检测限浓度样本，由突变型幽门螺杆菌菌株、野生型幽门螺杆菌菌株、阴性粪便样本组成，涵盖该产品可检出的所有突变型；精密度参考品9份，为弱阳性样本，由突变型幽门螺杆菌菌株、阴性粪便样本组成，涵盖该产品可检出的所有突变型。

试剂盒包含1份Hp-野生型对照（MC）和1份Hp-阴性对照（MC），用于检测过程的质量控制。Hp-野生型对照（MC）由幽门螺杆菌野生型菌株DNA、293T细胞基因组DNA、TE缓冲液构成，Hp-阴性对照（MC）由293T细胞基因组DNA、TE缓冲液构成。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了最佳生产工艺。申请人通过对引物浓度、探针浓度、TaqDNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度、PCR反应体系的体积、样本类型、样本采集方式和

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采集量、样本处理方式、模板加入量、PC