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中文摘要
3D打印PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂复合支架的制备及其对骨缺
损修复的应用研究
研究背景:
骨是人体最坚硬的组织,它为身体提供框架,与肌肉系统协同工作,使得身
体能够进行各种运动和动作,并且还支持和保护内部器官,参与造血和钙磷代谢
的调节,具有强大的自我修复和再生能力。尽管如此,在创伤或骨肿瘤引起的缺
损面积较大时,缺损部位将无法完成自我修复,骨缺损依然是骨科医生长久以来
面临的棘手问题。研究者们对骨缺损的治疗方法进行了各种各样的探索,但现行
的治疗方法各有弊端:自体骨移植能提供的骨量有限,且会产生二次创伤;同种
异体骨移植可能引起疾病传播和排异反应;异种异体骨移植的排异概率则更为明
显;不同材质的人工骨在孔隙结构、机械强度、降解性能、生物相容性及成骨性
能等方面各有限制,优化空间依然存在。
近年来3D打印技术发展迅速,采用3D打印技术制造骨缺损支架,我们能
够较好地调节内部孔隙结构,解决了部分材料孔隙结构不足的问题,为骨细胞的
长入和新生血管形成提供了充足的空间。
聚乳酸(polylacticacid,PLA)是以有机酸乳酸为单体,通过酯键连接的新
型聚酯材料,其可以在自然环境中被完全分解为二氧化碳和水,并且力学性能良
好,能提供较为强韧的支撑。聚三亚甲基碳酸酯(polytrimethylenecarbonate,
PTMC)是一种质地柔韧的、生物相容性良好的聚合物,已被证明可以在体内通
过表面侵蚀降解,降解过程中不会形成酸性化合物,从而可以避免材料周围pH
值过低导致自动加速降解。磷酸钙[Ca₃(PO₄)₂]本身是骨骼的重要组成物质,且本
身在降解过程中能释放出钙离子和磷酸根离子,能够促进骨髓间充质干细胞的分
化、诱导新骨的形成。在本研究中,我们意图发挥三种材料各自的优势,将聚乳
酸、聚三亚甲基碳酸酯、磷酸钙三种物质混合,研制了PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂复
合支架材料,通过3D打印技术制造出了多孔隙支架,并通过红外光谱检测、水
接触角检测、体外降解实验和万能拉力机测试验证了其组成成分、亲水性、降解
性能和力学性能。通过细胞实验系统地检测了包括细胞毒性、成骨诱导活性等性
能;通过制造新西兰兔股骨外侧髁骨缺损模型,将支架植入其中进行Micro-CT、
II
HE染色、Masson染色等进一步验证了其在体内的骨缺损修复效果。
目的:
本研究意图结合多种材料的优势,以PLA和PTMC为基础材料,以是否负
载β-Ca₃(PO₄)₂颗粒为变量,采用3D打印技术制备一种性能良好的多孔隙支架。
评价其降解性能、力学性能和亲水性等指标的同时开展体内、体外实验检测其相
关生物学性能,为探究3D打印PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂复合多孔支架的理化性质、
生物学特性、体内研究和临床用应提供理论支持,最终推动骨缺损修复的进展。
方法:
1.将材料溶解混合后,以是否负载β-磷酸三钙[β-Ca₃(PO₄)₂]微粒为变量,使
用挤丝机分别生产PLA/PTMC和PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂线材,使用熔融沉积型3D
打印机分别制作合适规格的PLA/PTMC和PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂多孔支架。
2.将一定数量的PLA/PTMC和PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂支架分别浸于PBS和
脂肪酶溶液中,置于37.5℃的空气振动浴中每日震动,定期称重检测其降解性
能;通过傅立叶红外光谱仪、电子万能试验机、标准型角接触测量仪对其进行性
能的表征。
3.在体外实验中,将支架与兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)混合培养,采
用细胞活死染色和CCK-8实验检测复合支架对BMSCs的细胞毒性和生物相容性;
采用茜素红染色、碱性磷酸酶定量检测和qPCR实验检测复合支架对BMSCs的
毒性和成骨诱导活性。
4.在体内实验中,制造远大于自我修复临界点的直径8mm的新西兰兔股骨
外侧髁骨缺损模型,分别将PLA/PTMC和PLA/PTMC-Ca₃(PO₄)₂支架置入其中,
在4,8,12周时取股骨标本,采用Micro-CT,HE染色,Masson染色等方法在骨
缺损修复模型中检测复合支架对于骨缺损修复的促进作用。
结果:
1.使用3D打印技术成功制备了含有PLA、PTMC、β-Ca₃(PO₄)₂三种物质的
复合多孔支架。
2.在降解实验中,截止第14
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