薄板层析法鉴定四环素纯度.pptVIP

层析：二、实验原理色谱chromatography一种分离技术。任何层析都具有两个相，固定相固定不动，流动相对固定相作相对运动。不同物质在两相间分配差异，随流动相以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。固定相：固体或液体(固定在载体上)流动相：流过固定相的液体、气体或超临界流体。（二）层析方法：根据机理可以分为：分配层析吸附层析凝胶层析离子交换层析亲和层析二、实验原理根据层析的方式：纸层析薄层层析柱层析利用不同溶质组分在固定相和流动相的两种液体中分配系数不同，展层时形成以不同速度移动的区带，达到分离。溶质易分配在固定相中?溶质易分配在流动相中?移动速度慢。移动速度快。薄板层析（TLC）二、实验原理04030102利用阻滞因子Rf值来表征各组分的差别移动：0Rf1,适宜范围0.2~0.8实验原理溶质移动距离同一时间流动相移动距离Rf=01支持物:中性、多孔粉末、无吸附活性、流动相自由通过02——硅藻土/纤维素/硅胶/氧化铝等，亲水物质能储留水。03固定相：一般为水及各种水溶液、甲酰胺、低级醇等。04流动相（展层剂）：与水不溶（或微溶）的有机溶剂。05本实验为硅藻土。06本实验为吸附在硅藻土上的EDTA缓冲液。07本实验为丙酮:乙酸乙酯:氯仿=3:1:1薄板层析法：二、实验原理四环素二、实验原理03四环素易溶于流动相液体，差向四环素易溶于固定相液体。02四环素发酵或保管不当时，生成抗菌作用弱，毒性强的差向四环素。01广谱抗生素04氢化骈四苯环（含共轭双键，可紫外吸收，荧光）本实验所需仪器玻璃板研钵天平移液管硅藻土EDTA缓冲液饱和氯化铵缸+架子展层剂展层缸点样毛细管小刀和直尺紫外灯氨水三、主要实验器材与试剂溶液配制（已配置）四、实验方法硅藻土处理：取薄板层析用硅藻土50g，加25ml浓盐酸和250ml水，搅拌煮沸10min，冷却，过滤，用蒸馏水洗，直至洗液对刚果红指示剂不显颜色，然后用流动相液体洗涤，过滤，105℃烘箱干燥。EDTA缓冲液（固定相）：在40ml甘油中，加入10ml聚乙二醇400，摇匀即得20%（V/V）聚乙二醇400的甘油溶液（保湿），再加入950mlpH70.1MEDTA（鳌合）溶液，混匀即得EDTA缓冲液。展层剂（流动相）：取pH7EDTA溶液5ml，缓慢加在200ml（丙酮:氯仿:乙酸乙酯=3:1:1）溶液中，然后倒入展层缸中。样品配制：称取100mg成品四环素，溶于5ml甲醇中得2%（W/V）溶液。四、实验方法硅藻土1g研钵EDTA缓冲液2ml蒸馏水0.75ml研匀（颗粒适中、无气泡）置饱和NH4Cl缸室温放置无明显水渍厚度涂均匀，特别下边缘涂满平整（二）层析操作*************上课前，每组洗干净3块玻璃板、1个研钵、1根研磨棒，去离子水润洗，放入实验室后面的烘箱内烘干，研钵倒扣放置！按组号签到。生物分离工程基础实验指导教师：龚小雁张秀萍生物分离工程实验I基础实验：第11/12周薄板层析法鉴定四环素成品纯度第14周PEG400/(NH4)2SO4两水相系统相图的制作第15周两水相系统中蛋白质分配系数的测定第16周离子交换树脂总交换容量的测定实验一班：第11周周一，周四实验二班：第12周周一，周四薄板层析法鉴定四环素纯度实验一班：第14周周一实验二班：第14周周四两水相萃取相图制作实验一班：第15周周一实验二班：第15周周四两水相萃取蛋白质分配系数测定实验一班：第16周周一实验二班：第16周周四离子交换树脂总交换容量的测定04030201实验内容及时间实验时间安排表周次日期星期时间发酵实验5-212分离实验5-112115月6日星期一13:30实验一班5月9日星期四13:30实验一班125月13日星期一13:30实验二班5月16日星期四13:30实验二班135月20日星期一13:30实验二班5月23日星期四13:30实验一班145月27日星期一13:30实验二班实验一班5月30日星期四13:30实验一班实验二班156月3日星期一13:30实验二班实验一班6月6日星期四13:30实验一班实验二班166月8日星期六13:30实验二班实验一班6月13日星期四13:30实验一班实验二班1