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细胞工程
第一节细胞工程
一、植物细胞工程的基本技术
1.细胞工程概念:细胞工程是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性生物工程。(P31)
①原理方法:细胞生物学、分子生物学和发育生物学;
②操作水平:细胞器、细胞或组织水平;
③目的:得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品;
④分类:植物细胞工程、动物细胞工程。
(一)植物细胞的全能性
1.概念:细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。(P34)
2.是否表现出全能性的两种判断标准:
(1)细胞经分裂和分化后是否产生完整生物体。
(2)细胞是否能分化成其他各种细胞。
3.判断以下例子是否表现出了细胞的全能性
(1)利用菊花茎段培养获得试管苗是。
(2)芽原基的细胞发育为芽,叶原基的细胞发育为叶否。
(3)受精卵发育成个体是。
(4)蜜蜂的孤雌生殖中,卵细胞直接发育成雄蜂是。
(5)造血干细胞可分化形成多种血细胞否。
(6)通过花药离体培养,获得单倍体幼苗是。
(7)胚胎干细胞可分化发育成为各种组织器官的细胞是。
(8)种子发育成完整植株否。
4.细胞具有全能性的原因(物质基础):一般来说,生物体的细胞中都含有该物种的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所需的全部遗传信息。
5.生物体生长发育过程中细胞不表现全能性的原因(不离体的细胞无法表现出全能性的原因):在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会选择性地表达(从而形成生物体的不同组织和器官)。(P34)
6.是不是所有的活细胞都具有全能性?
不是,例如哺乳动物成熟的红细胞、植物成熟的筛管细胞。
7.细胞具有的全能性一定能表现出来吗?
不是,例如动物的体细胞。
8.比较一般情况下下列细胞全能性的大小
(1)受精卵>生殖细胞>体细胞
(2)分化程度低的细胞>分化程度高的细胞、
(3)分裂能力强的细胞>分裂能力弱的细胞
(4)植物细胞>动物细胞
(5)幼嫩的细胞>衰老的细胞
(二)植物组织培养技术
1.植物组织培养概念:将离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术。(P35)
2.离体培养的植物器官、组织或细胞被称为外植体。(P35)
3.植物组织培养的原理:植物细胞的全能性。
植物组织培养的生殖方式:无性生殖。
植物组织培养的分裂方式:有丝分裂。
菊花植物组织培养
1.菊花植物组织培养的原理
(1)植物细胞一般具有全能性;(P35)
(2)脱分化:在一定的激素和营养等条件的诱导下,让已经分化的细胞经过诱导后,失去其特有的结构和功能,转变成未分化细胞的过程。结果:形成愈伤组织。
*愈伤组织的特点:不定形的薄壁组织团块。(P35)一般不需要光照。此过程中涉及的生命活动只有细胞增殖(有丝分裂),没有细胞分化。
(3)再分化:脱分化产生的愈伤组织,在一定的培养条件下,再分化出芽、根等器官,进而形成完整的小植株。(P35)需要给予适当时间和强度的光照,诱导叶绿素的合成,使试管苗能够进行光合作用。此过程中涉及的生命活动既有细胞增殖(有丝分裂),又有细胞分化。再分化实质:基因的选择性表达。
(4)激素的作用:植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
它们的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向;
生长素用量与细胞分裂素用来的比值
结果
比值高
有利于根的分化,抑制芽的形成
比值低
有利于芽的分化,抑制根的形成
比值适中
促进愈伤组织的形成
2.选材:经常选择根尖(分生区)、茎的韧皮部(形成层)等。
原因:分裂能力强、分化程度低,容易诱导形成愈伤组织。
3.若培养物取自植物的幼茎、叶片等含有叶绿体的部位,愈伤组织中是否会含有叶绿体?为什么?
愈伤组织中不含有叶绿体;培养物经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞,因此,愈伤组织中不含有叶绿体。
4.植物组织培养中细胞表现出全能性的条件
(1)离体(最关键)。(2)严格的无菌条件。(3)适宜的培养条件。
(4)适宜浓度和比例的激素。(5)一定的营养条件。
5.为什么一定要离体才能表现出全能性?
若细胞不离体,细胞中的基因会选择性地表达,从而形成生物体的不同组织和器官,不能表现出全能性。
6.如何控制严格的无菌条件?
(1)用体积分数为70%的酒精对手、超净工作台、外植体进行消毒,对外植体处理还需要质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液,清洗外植体需要使用无菌水。
(2)对培养基和器械进行灭菌;
(3)接种操作必须在酒精灯火焰旁进行。
7.适宜的培养条件包括那些?
①温度(例如菊花植物组织培养应为18-22℃)。
②光照(
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