菌种选育理论和技术.ppt

次级代谢产物高产菌株的筛选①筛选营养缺陷型②筛选负变株或零变株的回复突变株③筛选去磷酸盐调节突变株磷酸盐对许多抗生素的生物合成有抑制作用第31页，共60页，星期日，2025年，2月5日④筛选去除碳源分解代谢突变株能被菌快速利用的碳源在被代谢后，对其他代谢途径的酶有抑制作用，例葡萄糖效应。葡萄糖效应：培养基中同时含有葡萄糖和乳糖，微生物先利用葡萄糖、葡萄糖利用完后才利用乳糖，出现两次菌体生长旺盛时期，若加入乳糖酶诱导物，也不产生乳糖酶，而是在葡萄糖利用完后才产生。方法：将菌在含有葡萄糖和以组氨酸为唯一氮源的培养基连续传代。⑤筛选氨基酸结构类似物抗性突变株许多抗生素和氨基酸有共同的前体第32页，共60页，星期日，2025年，2月5日⑥筛选二价金属离子抗性突变株二价金属离子可与产物或其中间体结合，抑制产物合成⑦筛选前体或前体结构类似物抗性突变株前体或前体结构类似物对菌体的生长和抗生素的生物合成有抑制作用⑧筛选自身所产抗生素抗性突变株第33页，共60页，星期日，2025年，2月5日第四节杂交育种4.1定义将两个基因型不同的菌株经吻合或接合使遗传物质重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株。4.2举例一株大肠杆菌A-B+Lac-SMrT1s另一株大肠杆菌A+B-Lac+SMsT1r混合培养后，长出少数菌落。第34页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.2.1细菌杂交在细菌中实现杂交的种类尚不多，主要是大肠杆菌，其他还有鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、淋病奈氏球菌等。大肠杆菌中存着致育因子F，有F因子为F+，没有F因子称F-。整合状态为Hfr。F因子有明显的感染性，大肠杆菌的接合，实质上是F因子的转移，所以F+和Hfr称供体菌，而F-称受体菌。第35页，共60页，星期日，2025年，2月5日4.2.2酵母杂交育种技术酵母繁殖方式：酵母为单细胞型真菌，一般以出芽方式生殖，在通常情况下，繁殖体为双倍体，但经过特定条件的诱导，可使其产生单倍体孢子并可出芽产生单倍体繁殖体。单倍体细胞具α及ε2两种交配型。两种交配型细胞经其细胞壁上特定的凝聚因子诱导而进行交配，恢复为双倍体；同一交配型细胞之间，则因细胞壁上凝集因子的存在而不能进行交配。在生活过程中，酵母细胞还可以形成三倍体、四倍体、多倍体或非整倍体细胞。第36页，共60页，星期日，2025年，2月5日一般而言，杂交育种运用了酵母的单双倍生活周期，将不同基因型和相对的交配型的单倍体细胞经诱导杂交而形成二倍体细胞，经筛选便可获得新的遗传性状。第37页，共60页，星期日，2025年，2月5日第五节原生质体技术菌体经溶菌酶处理后，去掉了细胞壁，露出球形且特别脆弱的原生质体。它对渗透压、振荡、离心等十分敏感。但由于原生质体结构与生理活性均未发生改变，故在适宜的条件下，可以再生出细胞壁进行细胞分裂。第38页，共60页，星期日，2025年，2月5日原生质体制备和再生的过程培养菌丝(细胞)洗涤菌丝溶菌酶处理菌丝形成原生质体、离心用高渗溶液洗涤原生质体过滤显微计数原生质体原生质体融合原生质体再生融合子的选择第39页，共60页，星期日，2025年，2月5日第六节分子育种6.1提高次级代谢产物的产量基因工程技术提高抗生素产量的主要手段1.增加限速酶的基因拷贝数2.增加正调节基因,去除负调节基因3.增加抗性基因的拷贝数第40页，共60页，星期日，2025年，2月5日6.1.1增加限速酶的基因拷贝数原理：EaEbEcEdABCDE(代谢产物）限速酶