酶非水相催化 (2).ppt

六、pH值特性在有机介质中酶所处的pH环境与酶在冻干或吸附到载体上之前所使用的缓冲液pH值相同，称为pH印记或pH记忆（pH-imprinting）;现象：脂肪酶催化三丁酸甘油与正庚醇的转酯反应，酶的反应速度与其冷冻干燥前水溶液的的PH密切相关，反应的最适PH接近于水溶液中的最适PH第23页，共72页，星期日，2025年，2月5日原因：当酶分子从水溶液转移到有机介质时，原有的解离状态不变，被保持在有机介质中；有机介质中酶催化反应的最适ph通常与在水溶液的pH接近；但有些有机溶剂中酶的最PH与水溶液中相差较大，还与缓冲液种类和离子强度有关;第24页，共72页，星期日，2025年，2月5日第四节

有机介质中酶催化反应的

条件及其控制酶在有机介质中的催化反应受各种因素影响，主要有酶、底物、有机溶剂种类、水含量、温度、pH值和离子强度等。第25页，共72页，星期日，2025年，2月5日一、有机介质中酶催化反应的类型1、合成反应2、转移反应3、醇解反应4、氨解反应5、异构反应6、氧化还原反应7、裂合反应第26页，共72页，星期日，2025年，2月5日1、合成反应有机介质中水含量极微，可催化水解反应的逆反应；（1）脂肪酶或酯酶催化有机酸和醇进行酯的合成反应：意义:酶催化酯合成可合成手性化合物,且酶的立体选择性主要是选择立体异构的醇。第27页，共72页，星期日，2025年，2月5日（2）蛋白酶可在有机介质中催化氨基酸进行合成反应，生成多肽第28页，共72页，星期日，2025年，2月5日2、转移反应如脂肪酸催化酯与有机酸反应生成另一种酯与有机酸,即转酯反应：第29页，共72页，星期日，2025年，2月5日3、醇解反应假单胞脂肪酶催化酸酐醇生成二酸单酯化合物即酸酐水解反应,例:第30页，共72页，星期日，2025年，2月5日4、氨解反应如脂肪酶催化酯类进行不对称氨解反应：R-苯丙氨酸甲酯酰胺叔丁醇第31页，共72页，星期日，2025年，2月5日5、异构反应如消旋酶催化一种异构体为另一种异构体例第32页，共72页，星期日，2025年，2月5日6、氧化还原反应（1）单加氧（2）双加氧（3）催化醛类或酮类还原成醇类第33页，共72页，星期日，2025年，2月5日（1）单加氧第34页，共72页，星期日，2025年，2月5日（2）双加氧第35页，共72页，星期日，2025年，2月5日（3）催化醛类或酮类还原成醇类第36页，共72页，星期日，2025年，2月5日7、裂合反应如醇腈酶催化醛与氢氰酸的反应第37页，共72页，星期日，2025年，2月5日二、酶的选择1、不同酶具不同结构和特性，同一种酶由于来源、处理法不同特性亦有差别；2、酶反应速度与酶浓度成正比；3、另注意酶的稳定性、底物专一性,对映体选择性、区域选择性、键选择性等第38页，共72页，星期日，2025年，2月5日三、底物的选择和浓度控制1、有机剂与水中酶的底物专一性不同；2、底物浓度对酶催化速度有明显的影响；3、有机介质中要考虑底物在有机溶剂和必需水层中的分配情况；4、高浓度底物会对反应产生不利影响。第39页，共72页，星期日，2025年，2月5日四、有机溶剂的选择1、有机溶剂的极性要选择恰当：极性过强,夺取较多酶表面水分子,使疏水性底物溶解度降低;极性过弱,底物难以进入必需水层;故取中间:2≤lgP≤5第40页，共72页，星期日，2025年，2月5日2、与水混溶的有机介质其含量对酶催化有影响。与水混溶的二氧六环介质,辣根过氧化酶(HRP)催化对苯基苯酚的聚合反应,随着二氧六环的含量增加,酶催化得到的聚合物的分子量也增加,80%时最大。二氧六环含量/%聚合物相对分子质量第41页，共72页，星期日，2025年，2月5日五、含水量的控制当其它因素不变时，系统含水量对酶活性有影响，只有在最适含水量时酶才有最高活力；最适水含量通常随溶剂极性增大（lgP减小）而增大；1水含量反应速度21341-已烷2-四氯甲烷3-甲苯4-苯第42页，共72页，星期日，2025年，2月5日六、温度的控制1、微水有机介质中含水量低，酶的热稳定性增强，其最适温度高于水溶液中催化的最适温度；2、温度低，酶的立体选择性高。Lam和Keinan的实验结果支持此结论；第43页，共72页，星期日，2025年，2月5日七、pH值的控制酶在有机介质中的最适PH值通常与在水溶液中催化的最适pH相同或接近；可通过调节缓冲液pH的方法调节有机介质中酶催化的pH值；酶在冷冻干燥过程中，pH状态有变化；