酶的发酵生产.ppt

关于酶的发酵生产第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.1酶生物合成的基本理论2.1.1RNA的生物合成——转录2.1.2蛋白质的生物合成——翻译2.1.3酶生物合成的调节第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、RNA的生物合成——转录转录是以DNA为模板，以核苷三磷酸为底物，在RNA聚合酶（转录酶）的作用下，生成RNA的过程。第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日二、蛋白质的生物合成——翻译翻译：以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA，酶和辅助因子的作用，合成多肽的过程。四个阶段1、氨基酸活化生成氨酰－tRNA2、肽链合成的起始3、肽链的延伸4、肽链合成的终止第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日肽链的终止，释放和修饰终止密码子释放因子肽链的修饰第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日操纵子模型（operonmodel)：是原核生物基因表达的调节机制。大肠杆菌乳糖操纵子是第一个被子发现的操纵子（Monod和Jacob，1961）操纵子及调节基因示意图三、酶生物合成的调节第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日酶合成调节的类型：诱导和阻遏1、酶合成的诱导乳糖诱导?-半乳糖苷酶的合成淀粉诱导a-淀粉酶的合成第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日①乳糖操纵子的结构E.coli能利用乳糖作为碳源，而利用乳糖作为碳源的酶只有当乳糖成为唯一碳源时才被合成。乳糖操纵子由三个结构基因（lacZ、lacY和lacA）、操纵基因Olac、启动基因Plac、和调节基因lacI所组成（图）lacZ，编码β-半乳糖苷酶lacY，编码β-半乳糖苷透性酶lacA，编码硫代半乳糖苷乙酰转移酶Olac，它位于启动子5`端的-5至+21之间。该位点可被乳糖阻抑蛋白相结合。lacI，它是一个独立的调节基因，编码乳糖阻抑蛋白。第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日乳糖操纵子模型第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日2、酶合成的阻遏（1）酶合成的反馈阻遏作用（末端代谢物阻遏、产物阻遏作用）酶催化作用的产物或代谢物途径的末端产物使该酶的生物合成受阻。引起反馈阻遏的物质，称为共阻遏物（辅阻遏物）。组氨酸对组氨酸合成途径中的10种酶的生物合成均起反馈作用第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日终产物Trp对色氨酸操纵子的调节第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日3、分解代谢物阻遏作用葡萄糖效应葡萄糖阻遏?-半乳糖苷酶的生物合成；第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日葡萄糖效应当细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基中生长时，通常优先利用葡萄糖，而不利用乳糖。只有当葡萄糖耗净后，细菌经过一段停滞期，不久在乳糖的诱导下β-半乳糖苷酶开始合成，细菌才能充分利用乳糖。这种现象过去称为葡萄糖效应。后来了解到这是由于葡萄糖降解物引起的，因此又称为降解物阻遏（cataboliterepression）。受降解物阻遏的酶类包括代谢乳糖、半乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等的操纵子。第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日lac操纵子的正调控—分解代谢物阻遏CAP---降解物基因活化蛋白分解代谢物激活蛋白，cAMP受体蛋白第16页，共40页，星期日，2025年，2月5日环腺苷酸受体蛋白CRP和CAP细菌中cAMP的含量与葡萄糖的分解代谢有关。当细菌利用葡萄糖为能源时，cAMP生成少而分解多，cAMP含量低；当环境中无葡萄糖可利用时，cAMP含量就升高。细菌细胞中含有一种能与cAMP特异结合的cAMP受体蛋白CRP（cyclicAMPreceptorprotein，CRP）。CRP未与cAMP结合时是无活性的。当cAMP浓度升高，与CRP结合并发生空间构象的变化而活化，cAMP与CRP结合生成的复合物即为CAP。以二聚体的方式与特定的DNA序列结合。第17页，共40页，星期日，2025年，2月5日第二节发酵工艺条件及控制工艺流程保藏细胞细胞活化细胞扩大培养发酵分离纯化酶原生质体固定化原生质体培养基无菌空气固定化细胞预培养第18页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、细胞活化与扩大培养活化：使用以前，必须接种于新鲜的斜面培养基上，在一定条件下进行培养，以恢复细胞的生命活动能力。扩大培养：增加发酵时的数量，经过一级至数级扩大培养。培养基称为种子培养基。第19页